[发明专利]一种微生物絮凝剂的制备方法

摘要

本发明公开了一种微生物絮凝剂的制备方法，在无菌台上，选择披发戈登氏菌单菌落作为纯种，然后用接种环将单菌接到灭过菌装有50mL液体LB 100mL的锥形瓶中，在摇床中进行发酵培养；将温度设定为30℃，培养72h；72h培养后，获得的发酵液即为微生物絮凝剂。本发明的微生物絮凝剂的制备方法，分离筛选出一种微生物，将其代谢产物制备成高效絮凝剂，并且具有无毒、环保的特点。这种微生物絮凝剂主要由生物活性物质组成，且易生物降解，无二次污染，克服了无机和有机絮凝剂使用时存在的安全与环境污染方面的问题，其对污水中悬浮物的絮凝能力与传统的絮凝剂相当。

主权项

1.一种微生物絮凝剂的制备方法，其特征在于，步骤如下：1)菌种的分离培养取样：取地表以下25cm处土壤30g置于200mL烧杯中粉碎后加蒸馏水溶解、过滤取其上清液；稀释水样：将1瓶90mL和5管9mL的无菌水排列好，按10‑1、10‑2、10‑3、10‑4、10‑5、10‑6依次编号；在无菌操作条件下，用10mL的无菌移液管吸取10mL上清液置于第一瓶90mL无菌水中，将移液管吹洗3次，摇匀即为10‑1浓度菌液；取10‑1浓度菌液1mL加入编号为10‑2管，混匀获得10‑2浓度菌液；取10‑2浓度菌液1mL加入编号为10‑3管，混匀获得10‑3浓度菌液；取10‑3浓度菌液1mL加入编号为10‑4管，混匀获得10‑4浓度菌液；取10‑4浓度菌液1mL加入编号为10‑5管，混匀获得10‑5浓度菌液；取10‑5浓度菌液1mL加入编号为10‑6管，混匀获得10‑6浓度菌液；平板涂布接种：用1mL无菌移液管从10‑1稀释水样中吸取1mL水样分别接入牛肉膏平板培养基、高氏一号平板培养基、查氏平板培养基，涂布均匀；同样的方法，从其他各种稀释水样中吸取1mL水样均匀涂布于对应得各种平板培养基；涂布结束后，用透明胶带封装好放入生化培养箱中，控制温度30℃，培养3天；菌种分离：选取菌种分布均匀的平板，在其上挑出单个菌落转接于装有同样培养基的试管斜面培养基，依次编号后放入生化培养箱，控制温度30℃，进行纯化培养；初步筛选方法：将分离得到的纯种菌株接种到对应的培养液中，控制温度30℃，摇床转速控制150r/min，振荡培养72h；培养液发酵培养后取出，静置20分钟用滴管取上清液2mL，加入50mL4g/L的高岭土悬浊液中，同时加入1mL浓度为1％的CaCl2溶液作为助凝剂，快速振荡1min后，视其絮凝矾花出现的快慢和沉降速度来进行絮凝剂产生菌的初筛；复选方法：在100mL量筒中加入100mL 4g/L高岭土悬浊液，2mL发酵液上清液，培养液静置20分钟后用移液管吸取，下同，2mL浓度为1％的CaCl2助凝剂，调节pH值至7.0，用玻璃棒快速搅拌1min，慢速搅拌2min，静止10min；同时以不加发酵液上清液的高岭土悬浊液作为对照液；取同一高度40mL处高岭土悬浊液上清液10mL于浊度计比色管中，通过测其浊度来衡量其絮凝率；絮凝率的计算方法如下：式中，A——对照上清液的浊度值；B——样品上清液的浊度值；选中其中一株絮凝率最高的菌株；菌种的鉴定：对筛选出的菌株提取DNA，并进行测序，与美国NCBI数据库进行比对，鉴定出微生物的种类，结果表明为披发戈登氏菌；2)在无菌台上，选择筛选出的披发戈登氏菌单菌落作为纯种，然后用接种环将单菌接到灭过菌装有50mL液体LB 100mL的锥形瓶中，在摇床中进行发酵培养；将温度设定为30℃，培养72h；72h培养后，获得的发酵液即为微生物絮凝剂。