[发明专利]一种口腔幽门螺杆菌培养方法

摘要

本发明公开了一种口腔幽门螺杆菌(Hp)培养技术，本发明采取新型Hp培养基和人工“氨云”技术。培养基中的营养成分更适合于Hp生长繁殖，造成人工“氨云”的技术；先将唾液经过强酸特殊处理后产生人工“氨云”，这种人工“氨云”，保护在强酸的环境下Hp使它不被强酸损害。同时培养基采用模拟口腔生化环境，用“强酸”去杀灭唾液中其它细菌，让Hp能更好地生长，培养技术中不使用任何抗菌素。

主权项

一种口腔幽门螺杆菌培养方法，包括以下步骤：步骤1：取试管，加500微升的0.4Mol/L的尿素水溶液；步骤2：加1mL的0.15Mol/L的HCl到步骤1中的试管内，然后再加1mL的唾液到步骤1的试管内，此时尿素的最后浓度是0.08Mol/L，HCl浓度是0.06mol/L，用吸管将试管内溶液混合均匀；步骤3：将步骤2试管放入孵化器在37℃保持5分钟；步骤4：取步骤3中溶液0.5ml加4.5ml的PBS溶液混合得混合液；步骤5：将步骤4中混合液吸取500微升放在培养基和TSA表面上；步骤6：将步骤5处理后的培养基放在密封的培养瓶中在37℃下培养5‑7天，所述培养瓶内放有盛有蒸馏水的开口烧杯提供一定湿度，培养瓶中还包括化学试剂GasPak‑EZ以吸收空气中的氧，使培养瓶中空气只含7％氧，当放入培养基后拆开GasPak‑EZ包装；所述0.4Mol/L尿素水溶液的配制方法如下：取0.48g尿素溶于20mL重蒸馏水中即得；所述0.15Mol/L的HCl配制方法如下：取12mol/L的浓盐酸0.1mL与7.9mL重蒸馏水混合即得；所述PBS的配制方法如下：10mM Na₂HPO₄、1.7mM KH₂PO₄、2.7mM KCl、137mM NaCl，加重蒸馏水至1000毫升；所述培养基由人的红细胞、人白蛋白和多种微量矿物质组成。