[发明专利]一锅四酶法制备dTDP-L-鼠李糖的方法在审
| 申请号： | 201610188176.3 | 申请日： | 2016-03-29 |
| 公开（公告）号： | CN105803020A | 公开（公告）日： | 2016-07-27 |
| 发明（设计）人： | 郭忠武;李思强;马俊才;王红;陈宗刚;顾国锋 | 申请（专利权）人： | 山东大学 |
| 主分类号： | C12P19/30 | 分类号： | C12P19/30 |
| 代理公司： | 济南金迪知识产权代理有限公司 37219 | 代理人： | 朱家富 |
| 地址： | 250199 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明涉及一锅四酶法制备dTDP‑L‑鼠李糖的方法，包括如下步骤：(1)配制含有脱氧核糖胸苷三磷酸、Glc‑1‑P、MgCl2、焦磷酸水解酶、NAD+、NADH、合成酶Cps23FL的反应体系；(2)将反应体系在16～38℃的条件下，反应，然后加入合成酶，继续反应，制得反应液；(3)将反应液经超滤过滤，然后经纯化，干燥，制得dTDP‑L‑鼠李糖。本发明利用来源于肺炎链球菌23F型的dTDP‑L‑鼠李糖合成酶酶法体外合成dTDP‑L‑鼠李糖，纯化的合成酶纯度较高、具有较专一的底物识别能力和催化反应效率，并且容易制备，从而避免了传统酶法合成方法中粗酶液成分复杂的问题。 | ||
| 搜索关键词： | 一锅 法制 dtdp 鼠李糖 方法 | ||
【主权项】：
一锅四酶法制备dTDP‑L‑鼠李糖的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)配制脱氧核糖胸苷三磷酸浓度为0.01～5mM、Glc‑1‑P浓度为0.05～3mM、MgCl2浓度为0.008～160mM、焦磷酸水解酶浓度为1.5～2.5U/mL、NAD+浓度为0.05～0.15mM、NADH浓度为5～7mM、合成酶Cps23FL浓度为1.6～25.6μM的反应体系，体系配制采用HEPES缓冲液；(2)将步骤(1)制得的反应体系在16～38℃的条件下，反应12～18分钟，然后加入合成酶Cps23FN，合成酶Cps23FM和合成酶Cps23FO，使体系中合成酶Cps23FN浓度为1.5～2.5μM、合成酶Cps23FM浓度为1.5～2.5μM、合成酶Cps23FO浓度为1.5～2.5μM，继续反应25～40分钟，制得反应液；(3)将步骤(2)制得的反应液经超滤过滤，然后经纯化，干燥，制得dTDP‑L‑鼠李糖。
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