[发明专利]羊踯躅叶片再生植株的方法

摘要

本发明公开了一种羊踯躅叶片再生植株的方法，以羊踯躅叶片为外植体，经过暗培养、分化培养、继代培养、增殖培养、生根培养和炼苗移栽等步骤获得羊踯躅再生植株，解决了羊踯躅叶片离体再生芽的困难，不仅为快速繁殖优良羊踯躅提供了途径，而且为以后通过基因工程技术改良羊踯躅的抗性、花型及花色等性状，以及为羊踯躅遗传体系的建立打下了坚实的基础。本发明以羊踯躅叶片为外植体，可以在羊踯躅任意生长阶段进行选材扩繁，短时间内获得大量再生植株，繁殖系数高，移栽生长良好，为工厂化育苗奠定了基础。

主权项

一种羊踯躅叶片再生植株的方法，其步骤包括：(1)暗培养：将羊踯躅无菌苗叶片，用无菌解剖刀在叶片上划刻几刀，接种到预培养基中，暗培养3‑7天，其中预培养基为：1/2WPM+1.0～5.0mg/L ZT+0.02～1.0mg/L IBA+20～30g/L蔗糖+4.0～7.0g/L琼脂，pH为5.2～5.6；(2)分化培养：将步骤(1)叶片接种到分化培养基中进行愈伤组织及芽诱导，其中分化培养基为：WPM+1.0～5.0mg/L ZT+0.02～1.0mg/L IBA+20～30g/L蔗糖+4.0～7.0g/L琼脂，pH为5.2～5.6；(3)继代培养：将步骤(2)叶片接种到继代培养基中继续进行愈伤组织及芽诱导，其中继代培养基为：WPM+1.0～5.0mg/L ZT+0.02～1.0mg/L IBA+20～30g/L蔗糖+4.0～7.0g/L琼脂，pH为5.2～5.6；(4)增殖培养基：将步骤(3)诱导分化的带芽愈伤组织接种到增殖培养上进行增殖培养，增殖培养基为：WPM+0.1～2.0mg/L ZT+0.02～1.0mg/L IBA+20～30g/L蔗糖+4.0～7.0g/L琼脂，pH为5.2～5.6；(5)生根培养：将步骤(4)增殖的不定芽接种到生根培养基中，接种后光照培养；(6)炼苗移栽：从步骤(5)获得的组培苗中选取根系健壮的植株进行炼苗移栽。