[发明专利]底物亲和力提高的脂肪酸AMP连接酶突变体及其应用在审
| 申请号： | 201610145880.0 | 申请日： | 2016-03-11 |
| 公开（公告）号： | CN105779400A | 公开（公告）日： | 2016-07-20 |
| 发明（设计）人： | 王旻;吴旻;王露璇;王世静 | 申请（专利权）人： | 中国药科大学 |
| 主分类号： | C12N9/00 | 分类号： | C12N9/00;C12N15/52;C12N15/76;C12P21/02;C12R1/465 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 211198 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种脂肪酸AMP连接酶突变体及其应用，属于生物工程领域。所述脂肪酸AMP连接酶来源于玫瑰孢链霉菌。所述突变体是将脂肪酸AMP连接酶的第296位的甘氨酸变为丙氨酸、第302位的异亮氨酸变为缬氨酸，分别得到突变体pAL296、pAL302。本发明所涉及的脂肪酸AMP连接酶突变体可提高与外源性前体癸酸的结合水平，从而提高达托霉素的产量。本发明中采用计算机模拟、重叠延伸PCR及定点突变技术在体外对脂肪酸AMP连接酶编码基因dptE进行定点突变，筛选出亲和力显著提高的突变体pAL296、pAL302，通过构建重组穿梭质粒pAK296、pAK302并将其依次导入玫瑰孢链霉菌，筛选接合子，获得脂肪酸AMP连接酶亲和力提高的玫瑰孢链霉菌DCE296、DCE302，为提高达托霉素的生产水平奠定基础。 | ||
| 搜索关键词： | 亲和力 提高 脂肪酸 amp 连接酶 突变体 及其 应用 | ||
【主权项】：
两种脂肪酸AMP连接酶突变体，其特征在于，是对玫瑰孢链霉菌来源的脂肪酸AMP连接酶编码基因进行定点突变得到，是将脂肪酸AMP连接酶氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的的第296位的甘氨酸变为丙氨酸、302位的异亮氨酸变为缬氨酸，得到突变体pAL296、pAL302。
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