[发明专利]款冬花多糖的提取与纯化方法

摘要

本发明公开了款冬花多糖的提取与纯化方法，本发明采用水提法在超声条件下提取款冬花多糖，并采用木瓜蛋白酶结合Sevage试剂对款冬花多糖进行脱蛋白，采用大孔树脂法吸附色素进行脱色处理，再将脱蛋白和脱色后的多糖进行透析，进一步去除多糖中的杂质，得到纯度较高的款冬花多糖。本发明的款冬花多糖的提取与纯化方法，提取率高，除杂率高，多糖保留效果好。

主权项

款冬花多糖的提取与纯化方法，其特征在于：其包括以下步骤：(1)粉碎、脱脂预处理：将款冬花花蕾在80℃的烘箱中烘12h后，将其粉碎，过100目筛，按1g:10ml的料液比添加95％乙醇溶液，回流脱脂2次，每次时间为2h，将提取液过滤，将滤饼中的乙醇挥干；(2)预浸泡‑超声‑水提联合提取款冬花多糖：将预处理过的款冬花多糖与水按料液比1g:15～22ml的料液比混合，在30℃下浸泡6h，然后在60～70℃下超声10～30min后，水提2次，每次120～160min，收集提取液，并离心收集上清液，过滤后合并滤液，将滤液真空浓缩为原体积的八分之一，将浓缩后的滤液加入4倍体积的95％乙醇醇沉，静置24h后抽滤，依次用无水乙醇、丙酮、乙醚淋洗，干燥即得款冬花粗多糖；(3)脱蛋白：将粗多糖溶于蒸馏水中，配制成10mg/ml的粗多糖溶液，向粗多糖溶液中加入1.5～2.5％的质量浓度为1mg/ml，PH为7.0的木瓜蛋白酶溶液，置于55～65℃下80～100min，加入Sevage试剂，经3000r/min均质机充分混合20min，在3000r/min离心10min，除去沉淀，取上清液再加入Sevage试剂，重复上述操作2次，在上清液中加入4倍体积的95％乙醇醇沉，静置24h，抽滤后真空干燥即得脱蛋白后多糖；(4)脱色：将大孔树脂进行除杂、酸碱处理、干燥预处理，将脱蛋白后的多糖配置成2mg/ml的多糖溶液后，将大孔树脂和多糖溶液按1g:95～100ml的比例加入恒温振荡器中，振荡吸附6h，过滤即得脱色多糖；(5)透析：将步骤(4)所得多糖配置成10mg/ml溶液，用自来水流动透析48h，再用蒸馏水透析24h，然后用4倍体积的95％乙醇醇沉，静置24h后抽滤，依次用无水乙醇、丙酮、乙醚淋洗，50℃真空干燥即得款冬花多糖。