[发明专利]一种烟草疫霉接种创伤烟苗根系的方法

摘要

本发明公开了一种烟草疫霉接种创伤烟苗根系的方法,包括（1）第一阶段育苗、（2）第二阶段育苗、（3）烟草疫霉游动孢子悬浮液的制备、（4）根部创伤浸根接种、（5）抗病性鉴定。本发明可实现大规模数量的烟草品种抗病性鉴定，有效提高抗病性鉴定效率，特别适合从数量庞大的种质资源中筛选抗病靶标品种；并且移苗、接种方便，减少了不同操作人员间的人为误差，同时节省了鉴定时间，节约人力劳动成本，并且占用空间小，易于管理；同时，烟苗抗病性鉴定结果能够准确反映烟苗在田间的抗病能力。

主权项

1.一种烟草疫霉接种创伤烟苗根系的方法，其特征是：包括（1）第一阶段育苗、（2）第二阶段育苗、（3）烟草疫霉游动孢子悬浮液的制备、（4）根部创伤浸根接种、（5）抗病性鉴定，具体步骤如下：（1）第一阶段育苗：将烟草种子播于带基质的第一漂浮育苗盘中育苗30~40天，再锻苗2~3天，然后挑选出整齐一致的幼苗；（2）第二阶段育苗：将步骤（1）挑选出的幼苗连同基质移栽至无基质的第二漂浮育苗盘中，育苗10~20天，将幼苗培育至须根穿过第二漂浮盘进入漂浮池，然后剔除弱苗，筛选须根长势一致的烟苗，再进行剪叶，得到须根烟苗，以备接种；（3）烟草疫霉游动孢子悬浮液的制备：将烟草疫霉接种至OA培养基平板，于25~28℃下黑暗培养7~10天至菌丝长满整个平板，取菌丝切成小块得到菌丝块，菌丝块经液体培养诱导产生游动孢子囊，然后经低温处理促进游动孢子囊释放游动孢子，再用无菌水调节游动孢子浓度至104~6个/ml，得到烟草疫霉游动孢子悬浮液；（4）根部创伤浸根接种：将步骤（2）获得的须根烟苗连同第二漂浮育苗盘一起拿出沥水1~2天，再刮除第二漂浮育苗盘底部外露的须根，将步骤（3）得到的烟草疫霉游动孢子悬浮液置入浅盘中，浅盘的水位为1~2cm，温度为25~28℃，相对湿度75%以上，然后将第二育苗盘浸到浅盘中，于12h光照12h黑暗交替条件下，在浅盘中对烟苗维持接种24~36小时；（5）抗病性鉴定：接种后的烟苗继续漂浮培养，每7天调查一次烟苗黑胫病的发病率a，共调查3~4次，以最高一次发病率调查结果作为病情进行统计划分抗感性，发病率a=0为免疫或高抗品种，发病率0＜a≤25%为抗病品种，发病率25%＜a≤45%为中抗品种，发病率45%＜a≤65%为中感品种，发病率65%＜a≤80%为感病品种，发病率80%＜a≤100%为高感品种，其中免疫或高抗、抗病、中抗的品种即为抗性材料。