[发明专利]一种两核苷酸实时合成测序检测碱基连续突变序列的方法有效
申请号: | 201610119000.2 | 申请日: | 2016-03-02 |
公开(公告)号: | CN105648084B | 公开(公告)日: | 2019-07-12 |
发明(设计)人: | 肖鹏峰 | 申请(专利权)人: | 东南大学 |
主分类号: | C12Q1/6869 | 分类号: | C12Q1/6869;C12Q1/6806 |
代理公司: | 南京经纬专利商标代理有限公司 32200 | 代理人: | 楼高潮 |
地址: | 210096*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | 本发明提供一种两核苷酸实时合成测序检测碱基连续突变序列的方法,这里,碱基连续突变序列是指序列中相邻位置两个或者两个以上碱基发生单碱基序列突变,具体步骤为:(1)制备待测序列的单链DNA模板;(2)将测序引物与单链DNA模板结合;(3)对待测序列进行两核苷酸合成焦磷酸测序反应,通过有选择的几种具体的两核苷酸交替加入,完成连续的多个两核苷酸实时合成测序反应。该步骤中,根据分析样本所有可能的突变序列,设计两核苷酸加入类型和顺序,使得每一种具体的突变类型均有唯一、特征的不同测序图谱,然后按照设计的两核苷酸加入类型和顺序对分析样本进行合成测序,比较测序图谱、确定突变类型。 | ||
搜索关键词: | 一种 核苷酸 实时 合成 检测 碱基 连续 突变 序列 方法 | ||
【主权项】:
1.一种非诊断治疗的两核苷酸实时合成测序检测碱基连续突变序列的方法,其特征在于,该方法包括如下步骤:(1)制备单链DNA模板;(2)测序引物杂交:将测序引物与单链DNA模板结合;(3)利用两核苷酸对目的片段进行两核苷酸合成焦磷酸测序反应,所述的两核苷酸为从非标记或者标记的dATPaS、dCTP、dTTP、dGTP、以及ddATPaS、ddCTP、ddTTP、ddGTP中选择的两种不同的核苷酸,通过设计两核苷酸加入类型和顺序,使得每一种具体的突变类型均有唯一、特征的不同测序图谱,然后按照设计的两核苷酸加入类型和顺序对分析样本进行合成测序;(4)每个测序反应得到的测序信息包括加入的两核苷酸信息、以及核苷酸合成的数目信息,连续多个两核苷酸合成焦测序反应的测序信息构成测序图谱,由测序图谱确定分析样本的突变类型。
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