[发明专利]一种黄颡鱼组织中N4-乙酰基-磺胺甲噁唑残留标准物质的制备方法

摘要

本发明公开了一种黄颡鱼组织中N4‑乙酰基‑磺胺甲噁唑残留标准物质的制备方法，步骤是：A、选取已确认不含磺胺甲噁唑和N4‑乙酰基‑磺胺甲噁唑的雌性黄颡鱼；B、将磺胺甲噁唑用二甲基甲酰胺溶解，再用水稀释，配制成磺胺甲噁唑溶液；C、按60mg/kg黄颡鱼体重的剂量口灌磺胺甲噁唑溶液，将口灌磺胺甲噁唑后的黄颡鱼放在水中观察；D、选择没有回吐的黄颡鱼制备N4‑乙酰基‑磺胺甲噁唑残留标准物质，采集黄颡鱼背部肌肉、肝脏、肾脏、鳃和卵巢分别匀质，制备出黄颡鱼组织中N4‑乙酰基‑磺胺甲噁唑残留标准物质，冷冻保存。方法易行，操作简便，并对制备出的标准物质进行定值，均匀性和稳定性检验。

主权项

1.一种黄颡鱼组织中N4‑乙酰基‑磺胺甲噁唑残留标准物质的制备方法，其步骤是：A、选取60g～90g已确认不含磺胺甲噁唑和N4‑乙酰基‑磺胺甲噁唑的雌性黄颡鱼，在水族箱内养一周，用于制备黄颡鱼肌肉、肝脏、肾脏、鳃和卵巢组织中N4‑乙酰基‑磺胺甲噁唑残留标准物质，淡水养殖条件，水温为25℃～26℃，pH为7.9～8.1，连续充气，溶解氧值≥5.0mg/L；B、称取0.84g磺胺甲噁唑溶解在5mL的二甲基甲酰胺中，再用水稀释定容至100mL，配制成8.4mg/mL的磺胺甲噁唑溶液；C、按60mg/kg黄颡鱼体重的剂量口灌磺胺甲噁唑溶液，将口灌磺胺甲噁唑后的黄颡鱼放在水族箱中观察有无回吐，选择没有回吐的黄颡鱼用于制备N4‑乙酰基‑磺胺甲噁唑残留标准物质；D、将没有回吐的黄颡鱼放入另一水族箱中，养殖过程中不饲喂任何饲料；E、从水族箱中取养殖192h‑240h后的黄颡鱼，分别采集新鲜黄颡鱼的背部肌肉、肝脏、肾脏、鳃和卵巢组织，将相同组织合并；F、将采集新鲜黄颡鱼的背部肌肉，去皮后切成块，用高速匀质机将黄颡鱼的肌肉匀质，制备出肌肉中N4‑乙酰基‑磺胺甲噁唑残留标准物质，‑20℃冷冻保存；G、打开黄颡鱼的鳃盖，用采集新鲜黄颡鱼的鳃弓和鳃丝于离心管中，将其剪碎后，用高速匀浆机将其匀质，‑20℃冷冻保存；H、采集新鲜黄颡鱼的卵巢组织于离心管中用高速匀质机将黄颡鱼的卵巢匀浆，制备出卵巢中N4‑乙酰基‑磺胺甲噁唑残留标准物质，‑20℃冷冻保存；I、采集新鲜黄颡鱼的肝脏、肾脏组织分别放于塑料封口袋中，将袋内肝脏和肾脏组织碾碎，分别制备出肝脏和肾脏中N4‑乙酰基‑磺胺甲噁唑残留标准物质，‑20℃冷冻保存；黄颡鱼各组织中N4‑乙酰基‑磺胺甲噁唑定量分析方法如下：J、将黄颡鱼肝脏、肾脏、鳃、卵巢和肌肉标准物质样品进行处理：分别称取步骤F‑I得到的肝脏、肾脏、鳃、卵巢和肌肉标准物质样品，分别放到离心管中，加入50μL 1μg/mL的磺胺甲噁唑同位素内标：磺胺甲噁唑‑d4，再加入5mL乙腈，振荡30s，超声2－4min，再加入1g无水硫酸钠，振荡30s，8000r/min离心4－6min，转移上层液体到离心管中，再向残渣中加入4mL乙腈，振荡30s，8000r/min离心4－6min，合并两次乙腈提取液于同一离心管中，置49－51℃氮吹仪上氮吹至干，加入1mL定容溶液溶解残渣，振荡30s，加入试剂A，振荡30s，8000r/min，离心4－6min，弃去上层液体，下层液体过0.22μm聚醚砜水系滤头过滤，获得从肝脏、肾脏、鳃、卵巢组织中提取、净化后含N4‑乙酰基‑磺胺甲噁唑供HPLC‑MS/MS分析的液体；K、HPLC‑MS/MS的分析条件：色谱柱：Hypersil GOLD C18色谱柱；柱温：34－36℃，流速：0.2mL/min；流动相：有机相为试剂B，水相为试剂C和试剂D的水溶液，梯度洗脱程序：有机相与水相初始的体积比为20:80，维持1min；从1min到3min，有机相与水相的体积比由20:80均匀变为45:55；从3.0min到7.5min，有机相与水相的体积比45:55不变；再从7.5min到7.6min，有机相与水相的体积比由45:55均匀变为20:80；7.6min到8.5min，有机相与水相的体积比维持20:80不变；进样量10μL；所述的试剂A是甲醇、乙腈、乙酸乙酯、正己烷、环己烷试剂中的任意一种；所述的试剂B是乙腈、甲醇、乙醇、异丙醇、乙酸、甲酸试剂中的任意一种；所述的试剂C是乙酸、甲酸、氢氟酸、氨水中的任意一种；所述的试剂D是磷酸二氢铵、乙酸铵、甲酸铵、磷酸氢二铵中的任意一种；L、离子化模式：大气压电喷雾离子源，正离子模式；检测方式采用选择反应监测模式；喷雾电压：3500V；蒸发气温度：48－52℃；鞘气压力35arb；辅助气压力5arb；碰撞气及压力：氩气纯度≥99.999，1.5m Torr；离子传输毛细管温度：348－352℃；Q1PW0.7，Q3PW0.7。