[发明专利]胸腔积液性质的鉴定方法

摘要

一种胸腔积液性质的鉴定方法，通过高通量测序技术对三种不同疾病来源胸腔积液中的细胞外囊泡总RNA进行分析处理，筛选得到三种标本的差异表达miRNA，据此可实现对胸腔积液性质的鉴定。利用靶基因功能预测深入研究这些差异表达的miRNA，进一步提示miRNA在胸腔积液鉴别中的作用，为胸腔积液及相关疾病的诊断提供新的方法及理论基础。本发明方法设计合理可行，能够有效的协助建立一种无创的精准的胸腔积液诊断方法，为临床诊治工作提供新的思路。

主权项

一种胸腔积液性质的鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：A、采用超高速离心的方法提取三种不同疾病来源的胸腔积液标本细胞外囊泡；B、利用Trizol法提取标本细胞外囊泡总RNA；C、构建cDNA测序文库，主要步骤包括3’端、5’端的连接，第一链cDNA的合成，PCR扩增和片段大小的选择；D、使用Illumina Hiseq 2500进行高通量测序；E、对测序所得的序列进行去接头、去污染处理得到干净的小RNA分子序列，然后去除重复序列、mRNA降解片段、rRNA、tRNA、snRNA、snoRNA及piRNA，将剩余的序列与miRNA数据库中人miRNA序列进行比对分析，获得三种不同疾病来源的细胞外囊泡miRNA表达量信息；利用Cufflink软件分析三种标本的miRNA表达情况，同时使用Benjimini and Hochberg作为统计学方法，得到三种胸腔积液中细胞外囊泡miRNA的表达差异；F、采用超高速离心的方法提取待鉴定胸腔积液细胞外囊泡，采用与上述B、C、D、E类似的方法得到待鉴定胸腔积液细胞外囊泡miRNA表达量信息，与三种胸腔积液中细胞外囊泡miRNA的表达差异比对，判断待鉴定胸腔积液的性质。