[发明专利]一种生物酶法合成(R)-2-羟酸的方法

摘要

本发明公开了一种生物酶法合成(R)‑2‑羟酸的方法，所述方法以重组基因工程菌经发酵培养获得的湿菌体为催化剂，以式(Ⅰ)所示外消旋2‑羟酸为底物，以葡萄糖为辅助底物，以pH6.0～9.0缓冲液为反应介质构成反应体系，在20～50℃、150rpm条件下进行转化反应，反应完全后，将反应液分离纯化，获得(R)‑2‑羟酸；所述重组基因工程菌为含2‑羟酸脱氢酶HADH基因、羰基还原酶KAR基因和葡萄糖脱氢酶GDH基因的重组大肠杆菌；本发明一菌双质粒三酶共表达系统，创新的成功实现外消旋的2‑羟酸通过一个工程菌转化为单一构型的(R)‑2‑羟酸，避免多菌体的培养，降低菌体总浓度，简化反应过程，减少了中间产物的提取步骤，而且还明显提高了催化效率，更适合级联催化体系的工业应用。

主权项

1.一种生物酶法合成(R)‑2‑羟酸的方法，其特征在于所述方法以重组基因工程菌经发酵培养获得的湿菌体为催化剂，以式(Ⅰ)所示外消旋2‑羟酸为底物，以葡萄糖为辅助底物，以pH6.0～9.0缓冲液为反应介质构成反应体系，在20～50℃、150rpm条件下进行转化反应，反应完全后，将反应液分离纯化，获得(R)‑2‑羟酸；所述重组基因工程菌为含2‑羟酸脱氢酶HADH基因、羰基还原酶KAR基因和葡萄糖脱氢酶GDH基因的重组大肠杆菌；所述2‑羟酸脱氢酶HADH基因编码氨基酸序列为SEQ ID NO.8所示；所述羰基还原酶KAR基因的核苷酸序列为SEQ ID NO.11所示，所述葡萄糖脱氢酶GDH基因的核苷酸序列为SEQ ID NO.13所示；式(Ⅰ)中：