[发明专利]一种绵羊角蛋白抗体的制备方法

摘要

本发明涉及文物考古技术领域，公开了一种绵羊角蛋白抗体的制备方法，包括：A）角蛋白提取；B）抗原制备、免疫、血液收集；C）抗血清分离；D）抗体的制备。本发明方法制备的绵羊角蛋白抗体对绵羊角蛋白的反应灵敏度高，所需使用的抗原量极少。

主权项

一种绵羊角蛋白抗体的制备方法，其特征在于步骤如下：A）配制5‑7wt%的一硫酸氢钾水溶液，用饱和氢氧化钠溶液将一硫酸氢钾水溶液的pH调节为3.5‑5；接着按1:（40‑60）的浴比将绵羊毛添加到溶液中，在30‑35℃下水浴震荡0.5‑1.5h；然后取出羊毛并水洗至中性；将羊毛加入到其50‑90倍质量的混合溶液A中，在95‑105℃下反应3.5‑4.5h后过滤，得到粗角蛋白溶液，将粗角蛋白溶液透析、冷冻干燥后制得绵羊角蛋白粉；B）用生理盐水将上述制得的绵羊角蛋白粉配制成0.75‑1.25mg/mL的角蛋白溶液，将角蛋白溶液与Quick Antibody‑Rabbit 5W佐剂按体积比1:(0.8‑1.1)混合，得到免疫抗原液，使用免疫抗原液对兔子进行皮下多点注射，进行初次免疫；在初次免疫后的第3、5周时，使用免疫抗原液对兔子进行皮下多点注射，进行加强免疫；在进行初次免疫后的第7、9周时，使用免疫抗原液对兔子进行皮下多点注射，进行再加强免疫；当兔子血样中的抗体效价达到 1:20000 时，收集兔子血液；C）从上述收集的血液中分离得到抗血清；D）将蛋白A填料与磷酸盐缓冲溶液混合，搅拌后抽真空 20‑25min，得到无气泡的蛋白A填料液；将蛋白A填料液在无气泡条件下加入到玻璃柱中，得到蛋白柱；对蛋白柱进行清洗；对上述制得的抗血清进行稀释，稀释后加入到蛋白柱中进行上样，重复上样一次；对蛋白柱再次清洗，用甘氨酸溶液对抗体进行洗脱，洗脱后清洗蛋白柱，制得抗体。