[发明专利]一种添加前体物天冬氨酸提高石杉碱甲含量的蛇足石杉离体叶状体的培养方法

摘要

一种添加前体物天冬氨酸提高石杉碱甲含量的蛇足石杉离体叶状体的培养方法，所述方法步骤如下(1)所用材料材料为离体建立的蛇足石杉叶状体培养物；(2)叶状体培养物分割；(3)置于培养箱中培养；(4)收获叶状体培养物；(5)收获的叶状体于50℃温度的烘箱中烘干至恒重，研磨成粉末，用于制备石杉碱甲提取物，以高效液相色谱法检测提取物的石杉碱甲含量(ug/g)。本发明的技术效果是可获得大量蛇足石杉叶状体单位生物量累积更高石杉碱甲的药用植物资源，将该项技术扩大规模离体培养叶状体提取生产的药物石杉碱甲(Hup‑A)将产生极为重大的经济价值。

主权项

一种添加前体物天冬氨酸提高石杉碱甲含量的蛇足石杉离体叶状体的培养方法，步骤如下：（1）所用材料为离体建立的蛇足石杉叶状体培养物；在无菌条件下，将离体繁殖的叶状体组织块分割成0.05~0.1克鲜重的小块备用；（2）将分割好的叶状体小块接种到培养蛇足石杉叶状体的基本培养基培养瓶中，每瓶接种4小块，置于培养箱中培养；其特征在于，还包括以下步骤：（3）接种的叶状体培养30~40天时，在无菌条件下，用一次性注射器取已灭菌的前体物天冬氨酸0.25m mol/L~1m mol/L的溶液5毫升添加到叶状体培养瓶中，继续培养40~50天，收获叶状体培养物；（4）收获的叶状体于50℃温度的烘箱中烘干至恒重，研磨成粉末，用于制备石杉碱甲提取物，以高效液相色谱法检测提取物的石杉碱甲含量，单位为ug/g；其中，所述培养基按下列成分组成配制和处理：分割的蛇足石杉叶状体接种的基本培养基：1/4MS+蔗糖25%+琼脂粉0.6%，培养基pH为5.8~6.0，并将培养基在0.1MPa高温高压下灭菌25min处理后使用；分割的蛇足石杉叶状体先接种在基本培养基中生长30~40天，随后再向培养瓶中添加无菌的前体物天冬氨酸0.25m mol/L~1m mol/L溶液，每50mL基本培养基的叶状体培养瓶中添加5ml前体物天冬氨酸溶液，组成培养基。