[发明专利]一种团头鲂组织中氯硝柳胺残留标准物质的制备方法

摘要

本发明公开了一种团头鲂组织中氯硝柳胺残留标准物质的制备方法，其步骤A、选取不含氯硝柳胺的团头鲂；B、将氯硝柳胺投放到水中；C、将团头鲂放入含有氯硝柳胺的水体中浸泡后，用蒸馏水冲洗团头鲂的体表；D、从新鲜团头鲂的尾静脉处取血液，收集血浆，冷冻保存；E、将采集完血液的团头鲂体表的鳞片去掉，分别取团头鲂的肝脏、肌肉组织，冷冻保存；F、团头鲂血浆样品的前处理；G、团头鲂肝脏样品的前处理；H、团头鲂肌肉样品的前处理；对团头鲂血浆、肝脏和肌肉组织中氯硝柳胺残留标准物质的浓度进行定值，并进行均匀性与稳定性检验，制备出团头鲂血浆、肝脏和肌肉组织中氯硝柳胺残留标准物质。

主权项

一种团头鲂组织中氯硝柳胺残留标准物质的制备方法，其步骤是：A、选取300g～400g已确认不含氯硝柳胺的团头鲂，在水族箱内养一周，用于制备团头鲂组织中氯硝柳胺残留标准物质，淡水养殖条件，水温为24℃～26℃，pH为7.9～8.1，连续充气，溶解氧值≥5.0mg/L；B、将9.0mg氯硝柳胺溶解在5mL的二甲基甲酰胺中，再将其投放到320L水中，水体中氯硝柳胺的浓度为0.028mg/L，将团头鲂放到水体中进行浸泡，浸泡过程中不饲喂任何饲料；C、将团头鲂放入含有氯硝柳胺的水体中浸泡110－130h后，取出团头鲂，用蒸馏水冲洗团头鲂的体表2－4次；D、预先用1％质量和体积比肝素钠水溶液润洗过的注射器，从新鲜团头鲂的尾静脉处取血液，并将采集的血液放入事先用1％肝素钠水溶液润洗过的离心管中，4000r/min，离心5min，收集上层血浆，制备出血浆中氯硝柳胺标准物质，于干净的10mL离心管中，‑20℃冷冻保存；E、将采集完血液的团头鲂体表的鳞片去掉，分别取新鲜团头鲂的肝脏、肌肉组织，将采集的团头鲂的背部肌肉，去皮后切成小块，用匀浆机将团头鲂肌肉匀质，制备出肌肉中氯硝柳胺标准物质，‑20℃冷冻保存；将采集的肝脏组织放于塑料封口袋中，用手在袋外将袋内肝脏组织碾碎，混匀后制备出肝脏中氯硝柳胺标准物质，‑20℃冷冻保存；F、团头鲂血浆样品前处理：取1mL血浆样品，加入4mL氨化乙腈pH 8～12，涡旋振荡28－32s，超声提取9－11min，加入1.5g无水硫酸镁，涡旋振荡28－32s，7000r/min，离心4－6min，转移上层液体至10mL离心管中，向原试管中再加入4mL氨化乙腈重复提取一次，合并于10mL离心管中，置50℃氮吹仪上，氮吹至干，加入1mL70％体积比乙腈水溶液定容，再加入50mg C18 ODS粉，涡旋振荡28－32s，离心4－6min，过0.22μm有机系滤头，获得从血浆中提取、净化后含氯硝柳胺供HPLC‑MS/MS检测的液体；G、团头鲂肝脏样品的前处理：取1g肝脏样品，加入4mL氨化乙腈，涡旋振荡28－32s，超声提取9－11min，加入1.5g无水硫酸镁，涡旋振荡28－32s，7000r/min，离心4－6min，转移上层液体至10mL离心管中，向原试管中再加入4mL氨化乙腈重复提取一次，合并于10mL离心管中，置50℃氮吹仪上，氮吹至干，加入1mL 70％乙腈水溶液定容，再加入50mg C18 ODS粉，涡旋振荡28－32s，离心论坛4－6min，过0.22μm有机系滤头，获得从肝脏中提取、净化后含氯硝柳胺可供HPLC‑MS/MS检测的液体；H、团头鲂肌肉样品的前处理按照一种检测水产品中氯硝柳胺的前处理试剂盒及方法进行，获得从肌肉中提取、净化后含氯硝柳胺供HPLC‑MS/MS检测的液体；I、团头鲂血浆、肝脏、肌肉样品中氯硝柳胺的定值方法，采用高效液相色谱串联质谱法进行测定，HPLC‑MS/MS仪器条件按照一种检测水产品中氯硝柳胺的前处理试剂盒及方法条件进行设定，获得团头鲂血浆、肝脏、肌肉组织中氯硝柳胺的残留量；所述的1％肝素钠水溶液的配制方法：称取1g肝素钠用蒸馏水溶解并定容至100mL，摇匀后使用，现配现用或4℃冰箱保存，有效期为7d；所述的氨化乙腈pH值为8～12的配制方法：取稀氨水50μL～200μL加入500mL乙腈中配制成pH值为8～12的氨化乙腈；所述的稀氨水配制方法：取浓氨水25％～28％用等体积蒸馏水稀释配制成稀氨水；所述的70％乙腈水溶液的配制方法：乙腈和双蒸水按体积比70:30混匀配制而成。