[发明专利]从忽地笑鳞茎中分离筛选拮抗细菌的方法

摘要

本发明涉及一种从忽地笑鳞茎中分离筛选拮抗内生细菌的方法，该方法通过内生菌分离方法从忽地笑鳞茎中分离得到内生细菌，采用改进的对峙培养方法，将供试稻瘟病菌点在平板中央，培养2-3天，再在围绕稻瘟病菌十字交叉的四个角落分别接种4个细菌菌株，培养5-6天，观察有抑菌效果的即为筛选获得的拮抗细菌。获得一株对水稻稻瘟病菌有明显抑制作用的拮抗细菌，抑菌谱实验证明其对小麦赤霉病菌、烟曲霉和白色念珠菌也有抑制作用。本发明能显著提高筛选效率，所分离到的拮抗细菌可作生防菌，制成微生物制剂，为病害生物防治提供基础。

主权项

一种从忽地笑鳞茎中分离筛选拮细菌的方法，包括以下步骤：（1）取生长状况良好的忽地笑鳞茎，自来水冲洗，剥去黑褐色外层，切除根部，切留鳞茎中部（约1/3），并将其切成4块；（2）用NaClO浸泡，然后用无菌水反复冲洗4次；（3）将消毒后的单鳞片用刀片切成1 cm大小的小方块，将切好的鳞茎放在LB固体培养基上，30℃培养48h后将长出的菌体转接至相同的培养基上，30℃培养48h后划线纯化，直至纯化到单菌落，将纯化后所得的单菌落接至LB培养基斜面上保存；（4）将斜面保存的菌株接入LB液体培养基30℃震荡培养，活化后与供试稻瘟病菌在PDA固体培养基上进行对峙培养；（5）通过观察有无抑菌圈，挑选出现抑菌圈的可拮抗稻瘟病菌的内生细菌。