[发明专利]一种非疾病诊断目的的特异检测成熟microRNA表达水平的定量检测方法及试剂盒有效
| 申请号： | 201610049596.3 | 申请日： | 2016-01-25 |
| 公开（公告）号： | CN105506146B | 公开（公告）日： | 2019-01-18 |
| 发明（设计）人： | 闫亚平;崔浪军;李科 | 申请（专利权）人： | 陕西脉元生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6851 | 分类号： | C12Q1/6851 |
| 代理公司： | 西安通大专利代理有限责任公司 61200 | 代理人： | 王霞 |
| 地址： | 710065 陕西省西安市高*** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种特异检测成熟microRNA表达水平的定量检测方法及试剂盒，属于分子生物学技术领域，包括以下步骤：1)提取样品的microRNA，在反转录酶及Poly A聚合酶或Poly U聚合酶的作用下，反转录获取cDNA；2)根据microRNA成熟序列及pre‑microRNA序列，设计只针对microRNA成熟序列的上游引物，然后进行实时定量PCR，特异性检测成熟microRNA表达水平。该方法检测过程简便，检测结果灵敏准确，能够有效用于成熟microRNA(mature microRNA，长度为20‑23个碱基)在细胞或组织内表达水平的检测，检测成熟microRNA的特异性高于目前广泛使用的基于实时定量PCR的其他方法。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 特异 检测 成熟 microrna 表达 水平 定量 方法 试剂盒 | ||
【主权项】：
1.一种非疾病诊断目的的特异检测成熟microRNA表达水平的定量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：1)提取样品中包含microRNA组分的总RNA或小RNA，在反转录酶及聚合酶的作用下，反转录获取cDNA；所述聚合酶为Poly A聚合酶或Poly U聚合酶；2)根据microRNA成熟序列及pre‑microRNA序列，设计只针对microRNA成熟序列的上游引物，然后进行实时定量PCR，特异性检测成熟microRNA表达水平；检测成熟microRNA的上游引物为成熟microRNA的DNA序列加上末尾两个碱基，该末尾两个碱基是根据反转录过程中所选的Poly A聚合酶或Poly U聚合酶而定。
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