[发明专利]一种重组腺相关病毒的制备方法有效
| 申请号： | 201610035538.5 | 申请日： | 2016-01-20 |
| 公开（公告）号： | CN106987603B | 公开（公告）日： | 2018-09-07 |
| 发明（设计）人： | 吴阳;徐富强;何晓斌;林坤章 | 申请（专利权）人： | 中国科学院武汉物理与数学研究所 |
| 主分类号： | C12N15/866 | 分类号： | C12N15/866;C12R1/93 |
| 代理公司： | 武汉东喻专利代理事务所(普通合伙) 42224 | 代理人： | 胡星驰 |
| 地址： | 430071 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种重组腺相关病毒(rAAV)的制备方法，包括以下步骤：(1)将目标基因构建在重组型杆状病毒上，所述重组杆状病毒其基因组整合了制备rAAV所必需的腺相关病毒的Rep基因、Cap基因以及携带有目标基因的ITR核心表达元件；(2)将步骤(1)中制得的重组杆状病毒感染宿主昆虫幼虫，使得所述宿主昆虫幼虫体内产生大量rAAV；(3)将步骤(2)中获得的宿主昆虫幼虫裂解，提取rAAV并进行纯化。本发明提供的方法，通过一种高度整合的重组杆状病毒感染昆虫幼虫，从而大量制备品质稳定的基因治疗用rAAV载体。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 重组 相关 病毒 制备 方法 | ||
【主权项】：
1.一种重组腺相关病毒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将目标基因构建在重组杆状病毒上，所述重组杆状病毒其基因组整合了制备重组腺相关病毒所必需的腺相关病毒的Rep基因、Cap基因以及携带有目标基因的ITR核心表达元件；所述ITR核心表达元件通过5’端连接核酸片段和3’端连接核酸片段与所述Rep基因和Cap基因的表达框相连；所述核酸片段为长度在80bp‑140bp之间的连接核酸序列；(2)将步骤(1)中制得的重组杆状病毒感染宿主昆虫幼虫，使得所述宿主昆虫幼虫体内产生大量重组腺相关病毒；(3)将步骤(2)中获得的宿主昆虫幼虫裂解，提取重组腺相关病毒并进行纯化。
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