[发明专利]一种植物病毒抑制剂的快速筛选方法

摘要

本发明公开了一种植物病毒抑制剂的快速筛选方法，利用农杆菌注射方法使含有GFP标记的TMV侵染性克隆在本氏烟中侵染表达，1天后利用抗病毒药剂处理注射叶片，药剂处理2天后利用UV光照射叶片并观察记录病毒扩散情况，通过统计病毒扩散荧斑的大小，并对比荧光斑的大小判断植物病毒抑制剂对病毒的抑制效果，从而建立一种新的抗病毒抑制剂快速筛选方法，并且与传统的枯斑统计方法和田间药效实验进行对比，明确所建立方法与传统方法和田间药效实验的一致，为植物病毒抑制剂研发过程中初始抗病毒评价筛选提供新的手段。

主权项

一种植物病毒抑制剂的快速筛选方法，其特征在于，所述植物病毒抑制剂的快速筛选方法包括：制备含有TMV‑GFP的农杆菌菌液，取培养至5‑6叶期生长健壮的本氏烟，在叶片背面用针头打一小孔，用去掉针头的2mL针管吸取含有TMV‑GFP的农杆菌重悬液，注射到叶片内，每个注射点注射50‑100μL OD₆₀₀为0.4‑0.8的上述菌悬液；注射1天后，用待评价的植物病毒抑制剂喷雾处理注射叶片，植物病毒抑制剂为0.5％氨基寡糖素水剂400倍液，同时，利用清水喷雾处理做对照，2天后利用UV光照射，将药剂处理叶片和清水对照处理叶片放在同一视野中拍照，并在图片分析软件中十字交叉测叶片荧光扩散直径，以平均值为最终数据，对比分析植物病毒抑制剂对携带GFP的TMV抑制效果。