[发明专利]基于6B琼脂糖微球的镍金属层析介质的制备方法及其应用

摘要

本发明提供了一种基于6B琼脂糖微球的镍金属层析介质的制备方法，通过环氧氯丙烷活化琼脂糖微球与葡聚糖聚合，在不降低琼脂糖微球表面羟基数目的情况下，增加了琼脂糖微球的表面积，同时葡聚糖分子有效的降低了琼脂糖微球的电荷效应，再次将活化的琼脂糖微球连接L-天门冬氨酸并通过溴乙酸处理，生成具有较长延长臂，保证镍金属能够与重组蛋白高效结合，提高介质的纯化效果。该发明解决了现有琼脂糖微球中交联步骤繁琐，交联后介质偶联配基密度较低以及琼脂糖理化性质影响纯化效果的问题。

主权项

一种基于6B琼脂糖微球的镍金属层析介质的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：1)将环氧氯丙烷、2M的氢氧化钠和6B琼脂糖微球按体积比0.1～0.5:0.5～0.9:1进行混合，在反应温度为25～70℃的条件下，反应3～6小时制得活化的琼脂糖微球；2)将1M的氢氧化钠、0.1～0.3g/mL的葡聚糖水溶液和步骤1)制得的活化的琼脂糖微球按体积比0.3～0.9:1:1混合，在反应温度为25～37℃的条件下，反应5～10小时，得到葡聚糖修饰的6B琼脂糖微球；3)将环氧氯丙烷、2M的氢氧化钠和步骤2)制得的葡聚糖修饰的6B琼脂糖微球按体积比0.1～0.5:0.4～0.8:1进行混合，在反应温度为25～70℃的条件下，反应3～6小时，制得活化的葡聚糖修饰的6B琼脂糖微球介质；4)步骤3)反应结束后，立即用1mM的盐酸进行中和，然后用蒸馏水冲洗活化的葡聚糖修饰的6B琼脂糖微球介质；5)将步骤4)处理后的活化的葡聚糖修饰的6B琼脂糖微球介质与1M的碳酸钠溶液以体积比1:1或1:2混合后，加入L‑天门冬氨酸至终浓度为0.1M～0.3M，在50～60℃下反应5～10小时后，用蒸馏水冲洗活化的葡聚糖修饰的6B琼脂糖微球介质至中性；6)将步骤5)处理后的活化的葡聚糖修饰的6B琼脂糖微球介质与0.1M的碳酸钠溶液按体积比2:1或1.5:1混合，加入溴乙酸至终浓度为0.3M～0.6M，在25～30℃下反应5～12小时后，用蒸馏水冲洗介质至中性；7)将步骤6)处理后的活化的葡聚糖修饰的6B琼脂糖微球介质与100mM的硫酸镍溶液等体积混合室温反应2～3小时后，用蒸馏水冲洗介质至介质颜色不再变化，流出液中无镍离子为止，得到镍金属层析介质。