[发明专利]一种印度芥菜的组织培养方法

摘要

本发明公开一种印度芥菜的组织培养方法，包括如下步骤：a将印度芥菜种子消毒、清洗、破休眠；b然后将破休眠后芥菜种子播入培养基质；c将印度芥菜地上部分取回组培室；d将印度芥菜地上部分再消毒；e诱导印度芥菜愈伤的生成；f将愈伤组织置于培养基上继续培养、筛选；g将印度芥菜愈伤组织转到分化培养基上进行诱芽培养；h将印度芥菜壮苗转接到生根培养基上进行生根培养；i将试管苗放在室内培养3天，然后将试管苗取出组培瓶，洗掉根系上培养基，定植到步骤b的基质中，进行驯化炼苗培养，既得印度芥菜组培苗。通过本发明对印度芥菜愈伤组织的诱导以及分化培养和生根培养，可以为转基因、重金属转运机制研究提供基础材料。

主权项

一种印度芥菜的组织培养方法，其特征在于，包括如下步骤：a将印度芥菜种子用蒸馏水浸泡5h，然后放入5‑10％次氯酸钠溶液消毒10‑20min，将次氯酸钠溶液放入废液罐，用无菌水清洗种子3‑5次，然后将种子和经高压灭菌过的沙子按体积比1:4‑5混合，放入4℃冰箱，低温破休眠10‑20天；b然后将破休眠后芥菜种子播入培养基质；c将印度芥菜地上部分取回组培室，用流水冲洗0.5‑1h，去掉地上部分表面的灰尘、泥沙和微生物；d将印度芥菜地上部分放入超净工作台，用70‑75％酒精消毒40‑60s，再用0.1％‑0.15％升汞消毒10‑20min，将升汞溶液放到废液缸，然后用无菌水清洗地上部分8‑10次，使残留在植株上的升汞和酒精洗掉；e用解剖刀取0.5‑1cm长茎尖放在培养基上，诱导印度芥菜愈伤的生成；f将印度芥菜愈伤组织挑出，放入已转入目的基因的农杆菌悬浮液侵染5分钟；将愈伤组织取出，置于无菌的滤纸上沥干20min；将愈伤组织置于培养基上继续培养、筛选；g将印度芥菜愈伤组织转到分化培养基上进行诱芽培养；h将印度芥菜壮苗转接到生根培养基上进行生根培养；i将组培瓶瓶盖打开，将试管苗放在室内培养3天，然后将试管苗取出组培瓶，洗掉根系上培养基，定植到步骤b的基质中，在温室内进行驯化炼苗培养10天，既得印度芥菜组培苗。