[发明专利]一种用于鉴定美洲黑杨优良无性系的专用引物及其鉴定方法

摘要

本发明公开了一种用于鉴定美洲黑杨优良无性系的专用引物及其鉴定方法，该方法针对经优良选育得到的43株无性系，开发出6对SSR高效鉴别引物。本发明的突出优点包括：利用6对美洲黑杨专用微卫星引物，进行43个优良无性系遗传鉴定，鉴定方法操作简单、快捷，鉴定的准确率高，为美洲黑杨优树鉴定提供了可靠技术手段。本发明将为美洲黑杨优良无性系的使用提供重要的监督检验方法，其应用前景广阔，具有很好的实用性，能够产生较好的经济效益和社会效益。

主权项

1.一种用于美洲黑杨优良无性系遗传鉴定的方法，其特征在于：分别以待鉴定的美洲黑杨样品的DNA和标准对照样的DNA为模板，在任一对专用引物对引导下进行PCR扩增获得产物，对产物进行毛细管电泳，利用GeneMapper基因型分析软件进行基因型比对，若检测到基因型不同则为不同品种；若相同，查表中相应引物基因型出现的频率，计算待检样品与标准样品基因型相同的概率；若相同概率达不到检测要求≥99.5％时，继续选取其他引物进行检测，直至相同概率达到检测要求；其中，专用引物对由6对引物，名称和序列如下：NJFUP‑poly01：5’‑GACACCGTTTCTTTTCTGAG‑3’，5’‑ACCAGATCTTCATCTTCCAA‑3’；NJFUP‑poly02：5’‑TCGAATAGCTGGGATACTTC‑3’，5’‑TATCACCCGAACAAAAACTC‑3’；NJFUP‑poly05：5’‑CCTTAGCCTTCTCACACAAC‑3’，5’‑GGTCTCCATTTTAGCTGTCA‑3’；NJFUP‑poly06：5’‑GCCCAAACTCTTATTTGATG‑3’，5’‑TGGTGGAGGCTAGGATAGTA‑3’；NJFUP‑poly07：5’‑ATTGCTCTTGCAGAAATCAT‑3’，5’‑GGATACCAAGTCATCGGTAG‑3’；NJFUP‑poly10：5’‑AGAACTTGTGAGGCAGGTAA‑3’，5’‑AAAGCTCTCCCCTAACAAAG‑3’；所述专用引物能高效鉴别美洲黑杨的43个优良无性系，具体个体及每对引物扩增获得的基因型频率如下表所示：