[发明专利]一种定量检测棉花材料群体中MON757转化体含量的方法

摘要

本发明“一种定量检测棉花材料群体中MON757转化体含量的方法”，属于生物技术领域,包括如下步骤：(1)获取MON757转化体特异性片段序列的曲线方程，(2)获取棉花内标准基因ACP1基因的标准曲线方程，(3)随机选取待测棉花材料群体中的多个材料，研磨后混合提取待测DNA，(4)以待测DNA为模板进行MON757转化体荧光定量PCR反应测得待测DNA中MON757转化体的拷贝数；进行所述ACP1基因荧光定量PCR反应测得待测DNA中ACP1基因的拷贝数；(5)MON757转化体含量＝(MON757转化体拷贝数/ACP1基因拷贝数)×2，本发明为特异性鉴定群体中转基因抗虫棉MON757转化体的有无和含量提供了便利，具有高效快速、灵敏度高、特异性好、所需实验条件不高，有非常高的实用价值。

主权项

1.一种定量检测棉花材料群体中MON757转化体含量的方法，包括如下步骤：(1)获取MON757转化体特异性片段序列的曲线方程，所述曲线方程是以MON757转化体纯合材料的基因组DNA稀释成梯度浓度后作为模板，以梯度浓度的对数值为横坐标，对所述梯度浓度的模板进行MON757转化体荧光定量PCR反应所得的荧光信号值为纵坐标，拟合出来的方程；所述MON757转化体荧光定量PCR反应采用的引物和探针如下：757‑3QF：5‘‑GGCATGCACATACAAATG‑3’，757‑3QR：5‘‑CCCATTATTATTCTGTTGTTG‑3’，探针：757‑3QP：5‘‑FAM‑ACGAACGGATAAACCCTTTCTGGA‑BHQ1‑3’；(2)获取棉花内标准基因ACP1基因的标准曲线方程：所述曲线方程是采用步骤(1)中相同的MON757转化体纯合材料的基因组DNA，稀释成梯度浓度后为模板，以模板的浓度对数值为横坐标，对模板进行ACP1基因荧光定量PCR反应所得的荧光信号值为纵坐标，拟合出来的方程；其中所述荧光定量PCR反应采用的引物、探针、PCR反应体系和程序采用国家标准《农业部1943号公告‑1‑2013》中所记载的定量检测ACP1基因的方法；(3)随机选取待测棉花材料群体中的多个材料，研磨后混合提取待测DNA，(4)以待测DNA为模板进行MON757转化体荧光定量PCR反应，读取荧光信号值并带入所述MON757转化体特异性片段序列的曲线方程计算得到待测DNA中MON757转化体的拷贝数；以待测DNA为模板进行所述ACP1基因荧光定量PCR反应，读取荧光信号值并带入棉花内标准基因ACP1基因的标准曲线方程计算得到待测DNA中ACP1基因的拷贝数；(5)MON757转化体含量＝(MON757转化体拷贝数/ACP1基因拷贝数)×2。