[发明专利]一种人外周血循环肿瘤DNA中septin 9基因甲基化的检测试剂盒

摘要

本发明公开了一种人外周血循环肿瘤DNA中septin 9基因甲基化的检测试剂盒，其中包括：septin9基因目的位点的甲基化特异引物；septin9基因目的位点的非甲基化特异的双脱氧胞苷修饰引物；septin9基因特异的水解探针；内参基因的引物和内参基因的水解探针；所述septin9基因目的位点为septin9基因V2转录本γ1外显子区所包含的至少一个CpG位点；所述内参基因为GAPDH、β‑actin、B2M、SDHA、HPRT1中的一种或者多种。本发明所述试剂盒的组份设置及其结果判读方案使得检测过程简便，可操作性强。检测结果可靠、特异性好。

主权项

1.一种人外周血循环肿瘤DNA中septin 9基因甲基化的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包括：septin9基因目的位点的甲基化特异引物；septin9基因目的位点的非甲基化特异的双脱氧胞苷修饰引物；septin9基因特异的水解探针；内参基因的引物和内参基因的水解探针；所述septin9基因目的位点为septin9基因V2转录本γ1外显子区所包含的至少一个CpG位点；所述内参基因为GAPDH 、β‑actin、B2M、SDHA、HPRT1中的一种或者多种；所述septin9基因目的位点的甲基化特异引物包括：正向引物：5’‑ggctcttgagcccacaggc‑3’；反向引物：5’‑tttgggcagccaaacaaagttctctgt‑3’；所述septin9基因目的位点非甲基化特异的双脱氧胞苷修饰引物包括：正向引物：5’‑ gactcttgaacccacagac ‑3’，所述正向引物的3’端被双脱氧胞苷修饰；反向引物：5’‑tttgggcagccaaacaaagttctctgt‑3’；所述septin9基因特异的水解探针为：5’‑accgccgccgcgcgctcta‑3’；所述内参基因的引物和内参基因的水解探针如下：GAPDH ：正向引物：5’‑ttggaaaaggatatttttattgtaaaa‑3’；反向引物：5’‑aattccccaaaacacccaaacaccca‑3’；探针：5’‑ctaacctttaaaatcaaat‑3’；β‑actin：正向引物：5’‑taatttgtgtgtgtgttttggggtttg‑3’；反向引物：5’‑cctccacccaattcaaacaacaccaa‑3’；探针：5’‑aaatacacacaaacaccca‑3’；B2M：正向引物：5’‑tttatttgattataatggaaagtatg‑3’；反向引物：5’‑atttcataaactaaaaaacaaaaaaac‑3’；探针：5’‑aacaaataccttaaataat‑3’；SDHA：正向引物：5’‑gtggttagagttaatattatatagtatg‑3’；反向引物：5’‑aaatataatattaacaataaccaccat‑3’；探针：5’‑taatattaacaataaccac‑3’；HPRT1：正向引物：5’‑gattatagataggggtgagagaaaga‑3’；反向引物：5’‑cttatagataggggtgagagaaaga‑3’；探针：5’‑accacaaataatacacatcc‑3’。