[发明专利]力学敏感的miR-138-5p作为药物靶点在骨骼肌肉系统疾病中应用

摘要

本发明公开了一种力学敏感的miR-138-5p作为药物靶点在骨骼肌肉系统疾病中应用。技术方案是通过调控微管微丝交联因子1参与骨质疏松发生的microRNA，以及miR-138-5p的反义核苷酸antagomir-138-5p用于治疗骨质疏松症或其他骨骼肌肉系统疾病的用途。antagomir-138-5p在细胞和动物水平逆转了由力学去负荷条件引起成骨细胞骨形成抑制，antagomir-138-5p通过靶向条件MACF1，促进成骨细胞分化和骨形成。调控MACF1的miR-138-5p成为骨质疏松的治疗靶点，miR-138-5p的反义核苷酸antagomir-138-5p作为治疗骨质疏松药物的应用。

主权项

一种力学敏感的miR‑138‑5p作为药物靶点在骨骼肌肉系统疾病中应用，其特征在于包括以下步骤：步骤一、利用后肢去负荷小鼠动物模型，尾吊28天后，将主要承重骨股骨和胫骨剥离，提取总RNA，在已有研究中查询和骨形成有关的miRNAs，设计引物，利用qPCR技术检测尾悬吊小鼠模型中发生明显改变的miRNAs；步骤二、利用qPCR和Western blot技术检测去负荷条件下小鼠前成骨细胞MC3T3‑E1和承重骨中MACF1基因水平和蛋白水平表达的影响；步骤三、利用TargetScan数据库分析miR‑138与MACF1的靶向关系；步骤四、设计miR‑138‑5p的反义核苷酸，序列为5'‑CGGCCUGAUUCACAACACCAGCU‑3'；体外转染反义核苷酸到小鼠前成骨细胞MC3T3‑E1细胞中，利用矿化实验、ALP染色实验、以及qPCR技术检测miR‑138‑5p的反义核苷酸对成骨细胞的分化的影响；步骤五、利用qPCR技术检测体外转染miR‑138‑5p反义核苷酸对MACF1的影响；步骤六、利用三维回转模拟体外去负荷条件，培养已经转染miR‑138‑5p反义核苷酸的小鼠前成骨细胞MC3T3‑E1，之后利用qPCR技术检测去负荷条件下，反义核苷酸antagomir‑138‑5p对成骨细胞分化的影响；步骤七、采用小鼠后肢力学去负荷模型，在尾悬吊前5天，利用能够携带小核酸特异性到达骨形成部位的靶向递送系统6‑liposome，通过尾静脉注射反义核苷酸antagomir‑138‑5p(10mg/kg)，每两天注射一次，连续3次，然后尾悬吊28天；脱颈处死小鼠后，剥离取出相关的骨骼肌测量趾长伸肌、腓肠肌、股四头肌、比目鱼肌、胫前肌相对重量变化，检测antagomir‑138‑5p对骨骼肌的影响；步骤八、如步骤七，脱颈处死小鼠后，剥离取出股骨，去除骨表面的软组织，多聚甲醛固定后，采用MicroCT扫描，用Microview V2.1.2分析测试骨相关参数，并进行三维重建；剥离取出股骨胫骨，采用Reat time PCR检测antagomir‑138‑5p对承重骨骨形成的影响。