[发明专利]猪伪狂犬病毒gG的ELISA检测试剂盒

摘要

本发明涉及生物检测领域，具体提供了一种猪伪狂犬病毒gG的ELISA检测试剂盒，所述试剂盒包含包被有猪伪狂犬病毒gG蛋白重组抗原的酶标板；所述gG蛋白重组抗原的制备方法如下以gG蛋白编码基因为模板，利用引物对扩增得到gG蛋白基因片段，构建重组表达载体，通过原核系统表达gG蛋白重组抗原；所述引物对包括上游引物ATGAATTCAGAGAGGCCCCTCGGGA；下游引物TAAAGCTTGGCCGCGGGCGAGCCCAC。

主权项

一种猪伪狂犬病毒gG的ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含包被有猪伪狂犬病毒gG蛋白重组抗原的酶标板；所述gG蛋白重组抗原的制备方法如下：以猪伪狂犬病毒中国流行株的gG蛋白编码基因为模板，利用引物对扩增得到gG蛋白基因片段，构建重组表达载体，将所述重组表达载体转化入大肠杆菌Rosetta(DE3)中，加IPTG进行诱导表达；将表达产物通过His‑Tag镍柱亲和层析法纯化后，获得纯化的gG蛋白重组抗原；所述引物对包括：上游引物：ATGAATTCAGAGAGGCCCCTCGGGA；下游引物：TAAAGCTTGGCCGCGGGCGAGCCCAC；所述包被有猪伪狂犬病毒gG蛋白重组抗原的酶标板的制备方法包括如下步骤：1)用0.05M pH9.6的碳酸钠缓冲液稀释gG蛋白重组抗原，加入酶标板孔中，包被量为0.1‑1ug/孔；2)将酶标板用封板膜覆盖，置于37℃下30分钟，然后转至4℃孵育不低于12h；3)弃去酶标板孔内液体，向板孔中加入洗涤液，静置3分钟，重复3～5次；每次洗涤时弃去孔内液体，最后一次洗涤弃去洗涤液后，将残留液体在吸水纸上拍干；4)用含0.5‑4％BSA、2％‑8％新牛血清的0.01M pH7.4的磷酸盐缓冲液封闭酶标板；5)将酶标板置于37℃下1h，孵育后将孔内液体弃去，在吸水纸上拍干；6)向酶标板板孔加入含5％‑20％蔗糖的0.01M pH7.4的磷酸盐缓冲液室温孵育3‑5h，弃去孔内液体，自然晾干后，用加入干燥剂的包装袋抽真空密封保存。