[发明专利]一种油菜素内酯的快速高效检测方法

摘要

本发明提供一种油菜素内酯的快速高效检测方法，它包括以下步骤：以新鲜的葡萄果实为材料，用液氮快速研磨成粉末状，加入80-95％甲醇、同位素内标²H3油菜素内酯、²H3油菜素甾酮，低温超声提取，静置2-5h后过滤，取滤渣加80-95％甲醇再浸提1-2h，过滤，合并两次滤液；物理吸附除水后，依次过C18柱、sephadex LH-20柱、silica柱，甲醇洗脱得到富集的样品液；加入苯硼酸，进行衍生反应，冷却后浓缩至干；使用乙腈复溶，供液相色谱测定；选用乙腈和水作为流动相，乙腈和水的体积比为(6︰4)～(9︰1)，洗脱方式为等度洗脱，收集目的峰。该方法快速有效、基线稳定，对油菜素内酯分离良好。

主权项

一种油菜素内酯的快速高效检测方法，其特征在于包括以下步骤：(1)以新鲜的葡萄果实为材料，用液氮快速研磨成粉末状，以葡萄果实的重量为计算基准按4‑5mL/g的量比加入80‑95％甲醇作为浸提液，并同时加入同位素内标²H3油菜素内酯3‑5ng/g和²H3油菜素甾酮3‑5ng/g，低温超声提取30‑60min，接着4℃冰箱静置2‑5h，然后过滤，取滤渣以葡萄果实的重量为计算基准按0.3‑0.5mL/g的量比加80‑95％甲醇浸提液，浸提1‑2h，然后过滤，合并两次过滤的滤液；(2)除水：对步骤(1)得到的滤液进行物理吸附除水，得到上柱液；(3)上柱液过C18柱，进行样品吸附，使用40mmol/L的醋酸铵缓冲液作为洗脱液洗脱得到吸附液，吸附液过sephadex LH‑20柱进行除杂，使用甲醇作为洗脱液得到洗脱产物后，再过silica柱，甲醇洗脱得到富集的样品液；(4)按0.5mg/mL的量比在样品液中加入苯硼酸，于60‑80℃水浴衍生反应20‑40min，冷却后经旋转蒸发仪浓缩至干；(5)使用乙腈进行复溶，得到浓度为0.5‑5μg/mL的上样液，供液相色谱测定；(6)液相色谱测定：选用乙腈和水作为流动相，乙腈和水的体积比为(6︰4)～(9︰1)，选择的激发波长为280nm、发射波长为700nm或激发波长为310nm、发射波长为375nm，选择的检测器为荧光检测器，洗脱方式为等度洗脱，收集目的峰。