[发明专利]大鼠血浆中龙虎人丹多种有效成分的检测方法

摘要

本发明公开了一种大鼠血浆中龙虎人丹多种有效成分的检测方法，包括以下步骤：1.材料的准备，准备龙虎人丹、标准品和内标物。2.方法，2.1.溶液配制；2.2.血浆样品预处理；2.3.进行固相动态萃取SPDE；2.4.进行GC-MS/MS和2.5.方法学考察。本发明同时测定龙虎人丹中3种主要成分薄荷脑、异龙脑、龙脑及代谢物樟脑的血浆HS-SPDE-GC-MS/MS检测方法，为进行了龙虎人丹多种挥发性成分的药动学研究提供基础。

主权项

大鼠血浆中龙虎人丹多种有效成分的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：1.材料的准备准备龙虎人丹、标准品和内标物；2.方法：2.1.溶液配制各标准储备液的配制和内标溶液的配制；2.2.血浆样品预处理100μl血浆中加入10μl内标溶液后，涡旋1min，进行GC‑MS/MS分析；2.3.进行固相动态萃取SPDE采用PDMS萃取头：SPDE萃取头涂层为聚二甲基硅氧烷PDMS内径50μm，长56μm；2.4.进行GC‑MS/MS色谱：分析柱为VF‑WAXms毛细管柱30m×0.25mm ID；Agiletnt Technologies，USA，涂层为100％聚乙二醇0.25μm膜厚度；质谱：离子源为EI，碰撞气为氦气和氮气，流速分别为2.25及1.5ml·min‑1，EI源温度为250℃，电离能量为70Ev，分析时间为14.8min；2.5.方法学考察2.5.1.专属性：取空白血浆，除不加内标外，其他按“血浆样品预处理”项下操作，得空白血浆色谱图；分别取6只不同来源的空白大鼠血浆100μl，将一定浓度的标准溶液加入空白血浆中，除不加内标外，其他按“血浆样品预处理”项下操作，进样10μl，得空白血浆加标准品色谱图；取大鼠灌胃给予龙虎人丹后的血浆样品，依同法操作，得给药后血浆色谱图；2.5.2.标准曲线：以各标准样品血药浓度为横坐标，各标准样品与内标物的峰面积比值为纵坐标，用加权(w＝1/x2)最小二乘法进行回归运算，求得的直线回归方程即为标准曲线2.5.3.准确度和精密度：根据QC样品的各成分实测浓度计算本法的批 内和批间精密度与准确度；2.5.4.提取回收率：每一浓度两种处理方法的峰面积比值计算提取回收率；2.5.5.稳定性实验测试血浆样品室温放置12h稳定性、血浆样品‑80℃冻融3次稳定性、血浆样品‑80℃冻存15天稳定性，上述样品均按各分析批的随行标准曲线计算出各QC样品的浓度，计算各浓度的平均值与标示浓度的比值，从而得出样品的稳定性；2.5.6.稀释方法学：配制相当于高浓度QC样品5和10倍的样品，每个平行三样本，用空白血浆基质稀释5和10倍后，按“血浆样品预处理”项下操作，进行GC‑MS/MS分析。