[发明专利]一种长春新碱的ELISA检测方法

摘要

本发明公开了一种长春新碱的ELISA检测方法，具体涉及长春新碱ELISA检测方法。本发明所述方法的步骤包括(1)长春新碱人工免疫原和包被抗原的制备；(2)长春新碱抗体的制备；(3)利用长春新碱抗体与包被抗原组合，建立ELISA检测方法。本发明的有益效果在于该检测方法具有特异性强、速度快、灵敏度高、样品处理简单的特点。本发明最低检测限达0.10ng/ml，线性范围为0.10‑51.20ng/ml，能够满足临床血浆药物浓度的需要。本发明与长春碱、长春地辛及长春瑞宾没有交叉反应。本发明用于监测服用长春新碱病人血浆中长春新碱的浓度，为临床医生调整给药方案提供参考依据，对提高长春新碱临床治疗的有效性、减少毒副作用有着及其重要的意义。 1

主权项

1.一种长春新碱ELISA检测方法，其特征在于，步骤包括：(1)长春新碱人工免疫原和包被抗原的制备；其制备步骤为：1)长春新碱加入20‑30％肼乙醇溶液中，室温下反应24小时，过滤，减压浓缩去溶剂，300‑400目硅胶柱层析分离，得到4‑去乙酰‑长春新碱，将4‑去乙酰‑长春新碱和琥珀酸酐溶于无水吡啶中，60℃减压回流6小时，冷却至室温后有白色沉淀生成，过滤，得到4‑长春新碱‑半琥珀酸酯；2)取4‑长春新碱‑半琥珀酸酯和载体蛋白溶解在pH 8.0缓冲液中，充分震荡使其溶解，再取乙基‑(3‑二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐，充分溶解于pH 8.0缓冲液中；3)将得到的4‑长春新碱‑半琥珀酸酯和载体蛋白混合溶液边震荡边滴加入乙基‑(3‑二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐溶液，在摇床上37℃反应4小时，再用Sephadex柱分离偶联产物和未结合的小分子，经过透析、纯化、冻干后即得；(2)长春新碱抗体的制备；(3)利用长春新碱抗体与包被抗原组合，建立ELISA检测方法。