[发明专利]一种自然杀伤细胞扩增的方法和一种培养基组合物有效
| 申请号： | 201510080080.0 | 申请日： | 2015-02-13 |
| 公开（公告）号： | CN104673750B | 公开（公告）日： | 2018-04-27 |
| 发明（设计）人： | 张强;张荣胜;李程;项春生 | 申请（专利权）人： | 杭州易文赛生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0783 | 分类号： | C12N5/0783 |
| 代理公司： | 北京英创嘉友知识产权代理事务所(普通合伙)11447 | 代理人： | 王浩然,周建秋 |
| 地址： | 311121 浙江省*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种自然杀伤细胞扩增的方法，该方法包括如下步骤(1)从全血中分离淋巴细胞，并将淋巴细胞接种在第一培养基中进行第一扩增培养，得到第一扩增培养产物；(2)将所述第一扩增培养产物与第二培养基按1(0.5‑2)的体积比混合并进行第二扩增培养，得到第二扩增培养产物；(3)将所述第二扩增培养产物替代第一扩增培养产物返回步骤(2)的操作并循环进行步骤(2)的操作2‑7次。本发明还提供了一种培养基组合物，所述培养基组合物含有基础培养基和L‑谷氨酰胺、硫酸庆大霉素、甘露聚糖肽、白介素2和白介素15。本发明的扩增方法是一种简便、高效、易操作且安全性较高的自然杀伤细胞扩增方法。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 自然 杀伤 细胞 扩增 方法 培养基 组合 | ||
【主权项】：
一种自然杀伤细胞扩增的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：(1)从全血中分离淋巴细胞，并将淋巴细胞接种在第一培养基中进行第一扩增培养，得到第一扩增培养产物；(2)将所述第一扩增培养产物与第二培养基按1：(0.5‑2)的体积比混合并进行第二扩增培养，得到第二扩增培养产物；(3)将所述第二扩增培养产物替代第一扩增培养产物返回步骤(2)的操作并循环进行步骤(2)的操作2‑7次；其中，所述第一培养基含有基础培养基和10‑20mg/mL的L‑谷氨酰胺、100‑200IU/mL的硫酸庆大霉素、5‑10μg/mL的甘露聚糖肽、600‑800IU/mL的白介素2、10‑20ng/mL的抗人CD16单抗和10‑30ng/mL的白介素15；所述第二培养基含有10‑20mg/mL的L‑谷氨酰胺、100‑200IU/mL的硫酸庆大霉素、5‑10μg/mL的甘露聚糖肽、600‑800IU/mL的白介素2和10‑30ng/mL的白介素15；其中，所述第一培养基还含有8‑12体积％的血清，所述第二培养基还含有0.5‑10体积％的血清；所述血清为从分离所述淋巴细胞所用的全血中分离得到的自体血清。
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