[发明专利]减少抗草鱼呼肠孤病毒多克隆抗体中非特异性抗体的方法有效
| 申请号： | 201510050935.5 | 申请日： | 2015-01-30 |
| 公开（公告）号： | CN104558166B | 公开（公告）日： | 2017-12-26 |
| 发明（设计）人： | 陈瑞爱;徐家华;欧阳征亮;王新秋;蒋春英;张东霞 | 申请（专利权）人： | 肇庆大华农生物药品有限公司;广东温氏大华农生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C07K16/10 | 分类号： | C07K16/10;C07K16/06 |
| 代理公司： | 广州市越秀区哲力专利商标事务所(普通合伙)44288 | 代理人： | 罗伟添 |
| 地址： | 526238 广东省*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种减少抗草鱼呼肠孤病毒多克隆抗体中非特异性抗体的方法，依次包括以下步骤采用膜包对草鱼呼肠孤病毒进行浓缩；2)采用分子筛层析初步筛分草鱼呼肠孤病毒；3)采用离子交换层析纯化草鱼呼肠孤病毒；4)制备兔抗草鱼呼肠孤病毒多克隆抗体；5)去除抗草鱼呼肠孤病毒多克隆抗体中的非特异性抗体。通过纯化的方法，提高草鱼出血病毒的纯度和滴度，减少其它非病毒蛋白所产生的非特异性多克隆抗体。通过多克隆抗体与CIK细胞碎片结合，除去部分多克隆抗体中的非特异性抗体。 | ||
| 搜索关键词： | 减少 草鱼 呼肠孤 病毒 克隆 抗体 中非 特异性 方法 | ||
【主权项】：
一种减少抗草鱼呼肠孤病毒多克隆抗体中非特异性抗体的方法，其特征在于，依次包括以下步骤:2）采用分子筛层析初步筛分草鱼呼肠孤病毒；3）采用离子交换层析纯化草鱼呼肠孤病毒；4）制备兔抗草鱼呼肠孤病毒多克隆抗体；5）去除抗草鱼呼肠孤病毒多克隆抗体中的非特异性抗体;所述步骤5）包括如下步骤：51）将CIK细胞在Gibco的M199培养基上培养，待CIK细胞生长致密后，倒掉Gibco的M199培养基，加入0.2‑0.3%胰酶，待CIK细胞消化好后，倒掉胰酶并加入15‑20mLPBS溶液吹散并回收CIK细胞，然后在1500‑3000转/分钟离心10‑30分钟，去上清，加入15‑20mL PBS溶液，‑20℃反复冻融后8000转/分钟离心10‑30分钟，去上清液，得到CIK细胞碎片；52）在步骤51）得到的CIK细胞碎片中加入步骤4）中制备的抗草鱼呼肠孤病毒多克隆抗体血清10mL，悬浮沉淀，37℃孵育1h后8000转/分钟离心20分钟，收集上清溶液。
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