[发明专利]以Gemini表面活性剂反胶束从菠萝皮中萃取分离菠萝蛋白酶的方法

摘要

以Gemini表面活性剂反胶束从菠萝皮中萃取分离菠萝蛋白酶的方法，属于生物工程中反胶束萃取技术领域，本发明采用具有季铵盐Gemini表面活性剂的反胶束对菠萝皮中的菠萝蛋白酶进行萃取，萃取过程中仅需少量的表面活性剂，通过控制前萃液的pH值既能使菠萝皮粗提液中的菠萝蛋白酶转移至反胶束，又能减少表面活性剂对菠萝蛋白酶的污染；通过调节正己烷和正己醇的比例，还能提高菠萝蛋白酶的活性。本发明操作过程简单，菠萝蛋白酶活性损失少，酶活性回收率较高，萃取后所得菠萝蛋白酶的活性回收率可达163%，纯化倍数可达到4。

主权项

以Gemini表面活性剂反胶束从菠萝皮中萃取分离菠萝蛋白酶的方法，包括将干净的菠萝皮与pH值为5.5～6.5的磷酸缓冲溶液混合粉粹后，经渣汁分离，取得粗酶液；将粗酶液与甘氨酸‑氢氧化钠缓冲液和反胶束混合进行前萃取，再将前萃取取得的上层有机相与HAC‑NaAC缓冲液混合进行后萃取，最后将后萃取取得的下层水相冷冻干燥，得到纯菠萝蛋白酶；其特征在于：所述反胶束由季铵盐Gemini表面活性剂和正己烷、正己醇、水混合组成；所述季铵盐Gemini表面活性剂在反胶束中的浓度为0.01g/mL～0.03g/mL；所述前萃取是将NaCl浓度为0.05～0.2M、pH值为8～10.5的甘氨酸‑氢氧化钠缓冲液与粗酶液混合后再与反胶束以等体积比混合振荡后，经离心分离取上层有机相；所述后萃取是将KBr浓度为0.25～1M 、pH值为3.8～4.2的HAC‑NaAC缓冲液与有机相等体积比混合振荡后，离心分离取下层水相；所述冷冻干燥是将下层水相在压强为50±2Pa、温度为‑60℃～‑55℃下冷冻干燥。