[发明专利]一套提高根癌农杆菌介导的杨树遗传转化效率的方法

摘要

本发明公开了一套提高根癌农杆菌介导的杨树遗传转化效率的方法。本发明所提供的根癌农杆菌介导的杨树遗传转化方法，包括M1)和M2)M1)用含有目的DNA的重组根癌农杆菌转染杨树外植体得到转染外植体；M2)培养转染外植体得到外源基因稳定表达的杨树转基因植株；外植体的制备方法如下将杨树组培苗的叶片从垂直主脉方向一分为二，得到近叶柄端半叶片和远叶柄端半叶片；将近叶柄端半叶片的叶边缘去除得到外植体。实验证明，本发明的根癌农杆菌介导的杨树遗传转化方法，适用于杨树以及其他木本植物的根癌农杆菌遗传转化，该方法重复性强，不受基因型限制，外源基因能够得到稳定表达，转化效率能够得到很大提高，转化效率能达到40％。

主权项

根癌农杆菌介导的杨树遗传转化方法，包括M1)和M2)：M1)用含有目的DNA的重组根癌农杆菌转染杨树的外植体得到转染的外植体；M2)培养所述转染的外植体得到外源基因稳定表达的杨树转基因植株；所述外植体的制备方法如下：将杨树组培苗的叶片从垂直主脉方向一分为二，得到近叶柄端半叶片和远叶柄端半叶片；将所述近叶柄端半叶片的叶边缘去除得到所述外植体；所述杨树组培苗按照如下方法获得：将无菌杨树顶芽接入生根培养基在光照下培养20天得到所述杨树组培苗；所述培养所述转染的外植体得到外源基因稳定表达的杨树转基因植株包括A1)‑A5)：A1)共培养所述转染的外植体，得到共培养的外植体；A2)将所述共培养的外植体进行恢复培养，得到恢复培养的外植体；A3)将所述恢复培养的外植体进行分化培养得到抗性丛生芽；A4)将所述抗性丛生芽进行增殖培养得到抗性幼芽；A5)将所述抗性幼芽进行培养得到所述外源基因稳定表达的杨树转基因植株；所述将所述抗性幼芽进行培养得到所述外源基因稳定表达的杨树转基因植株包括B1)、B2)和B3)：B1)将所述抗性幼芽进行生根培养得到抗性植株；B2)将所述抗性植株的顶芽进行二次生根培养得到根成放射状生长的杨树转基因植株；B3)将所述根成放射状生长的杨树转基因植株进行二次分化培养得到所述外源基因稳定表达的杨树转基因植株。