[发明专利]检测食品中沙门氏菌的有扩增内标的PCR方法及试剂盒

摘要

本发明提供了一种检测食品中沙门氏菌的有扩增内标的PCR方法及试剂盒，涉及生物技术领域，本方法使用方便、可靠性好、检测周期短、灵敏度高、特异性强、成本低廉、操作步骤简单，适用于高通量操作、标准化操作。所述方法包括：(1)利用primer premier6.0软件设计针对沙门氏菌的一对特异性引物，再增加扩增原核生物16s rDNA保守序列的27F/1492R引物作为扩增内标，2对引物共同使用进行扩增；(2)取待检测样品增菌培养6-8小时；培养后的增菌液采用煮沸冻融法提取基因组DNA作为模板进行扩增；(3)取试剂盒的PCR反应预混液配置25ul反应体系进行扩增，琼脂糖凝胶电泳后紫外灯下观察检测结果。

主权项

一种检测食品中沙门氏菌的试剂盒，其特征是：该试剂盒包含：无菌去离子水，聚合酶链反应PCR反应预混液，对照品；所述PCR反应预混液含有PCR反应缓冲液，MgCl2，脱氧核糖核苷三磷酸，检测用引物，Taq DNA聚合酶，DNA染料；所述检测用引物为如下4条引物的混合物：salF：GGAACGAACTAATTCAGCGATA；salR：AGATGTCATTAACCTTGTGGAG；27F：AGAGTTTGATCMTGGCTCAG；1492R：TACGGYTACCTTGTTACGACTT；所述对照品分为阴性对照品和阳性对照品，阴性对照品为无菌去离子水，阳性对照品为salF/salR和27F/1492R两对引物的扩增产物经凝胶电泳纯化回收得到的DNA片段。