[发明专利]作为体内造血刺激剂的TAT‑HOXB4H重组蛋白质的制备方法

摘要

本发明公开了一种TATHOXB4H重组蛋白质的制备方法，所述制备的重组蛋白质应用在制备用于中作为活体内投药以促进造血干细胞由骨髓动员至周边血液的药物，涉及一种C‑端含有组胺酸标记的HOXB4重组蛋白质。本发明制备TATHOXB4H重组蛋白质的方法解决了现有技术中由培养液纯化而得到的重组蛋白质产量少且安定性差的技术问题。本发明的制备方法系针对TAT‑HOXB4H重组蛋白质的后续纯化过程及储存缓冲液作改良，使制备的TAT‑HOXB4H重组蛋白质能够应用到制备成直接活体内投药的医药组合物，增加使用者骨髓内造血干细胞的绝对数目，从而促进造血干细胞动员至使用者的周边血液。

主权项

一种TAT‑HOXB4H重组蛋白质的制备方法，其特征在于：所述方法包含在大肠杆菌宿主表现后，以下述之方法进行TAT‑HOXB4H重组蛋白质的纯化：(i)将表现该蛋白质的不纯溶液通入一HisTrap管柱；(ii)冲洗该HisTrap管柱；(iii)将该部分纯化的蛋白质由该HisTrap管柱溶离出，而形成一部分纯化的蛋白质溶液；(iv)将该部分纯化的蛋白质溶液通入一MonoSP管柱；(v)冲洗该MonoSP管柱；(vi)将纯化的蛋白质，呈变性形式，由该MonoSP管柱溶离出；并利用疏水性化合物将溶离出的变性蛋白质以下列步骤再折迭：(i)将该溶离出的变性蛋白质与一疏水性化合物溶液混合形成一蛋白质与疏水性化合物溶液；(ii)将该蛋白质与疏水性化合物溶液去盐而得一蛋白质与疏水性化合物去盐溶液；(iii)利用超过滤制程将该疏水性化合物由该蛋白质与疏水性化合物去盐溶液中移除；并且该蛋白质于纯化后储存在IMDM培养基或DMEM培养基中，以提高纯化蛋白质之安定性。