[发明专利]一种基于点击化学的二价铜离子的检测方法及试剂盒

摘要

本发明涉及一种基于点击化学的二价铜离子的检测方法，其特征在于，包括制备反应液步骤、制备胶体金步骤、制备胶体金颗粒‑链霉亲和素（AuNP‑SA）偶联物步骤以及检测步骤；相应的提供一种划有跟Click Azide片段互补核酸和Click CHCH核酸作为检测线和质控线的基于点击化学检测二价铜离子试剂盒，以解决目前二价铜离子的检测方法操作复杂，重复性差、灵敏度差的问题，由于检测结果使用肉眼就能观察到，因此被可广泛地应用于基层实验室中。

主权项

一种基于点击化学的二价铜离子的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：制备反应液步骤：将修饰了叠氮基团的Click Azide序列短单链核酸、修饰了炔基基团的标记有生物素的Click CHCH序列短单链核酸、待检测样品和抗坏血酸钠先后加入磷酸缓冲液中，混匀，20℃‑25℃条件下反应1小时，使Click Azide的叠氮基团和Click CHCH的炔基基团在Cu+催化的作用下环加成反应连接起来，形成一条有生物素标记的长链序列；制备胶体金步骤：在圆底烧瓶中加入100ml 0.01％的HAuCl4溶液，磁力搅拌加热至沸腾，并向上述溶液中加入4ml、1％枸橼酸钠，溶液变为酒红色后，继续煮沸10分钟，停止加热继续搅拌15分钟，得到胶体金溶液，胶体金溶液4℃避光保存；制备胶体金颗粒‑链霉亲和素(AuNP‑SA)偶联物步骤：向1mL的上述胶体金溶液中加入6μL的0.1M K2CO3混匀，5分钟后加入10μg的链霉亲和素，室温振荡30分钟；加入100μL、10％牛血清白蛋白后封闭30分钟，在12×103rpm条件下，4℃离心10分钟，得到AuNP‑SA偶联物；弃上清，用100μL、0.2M浓度、pH9.0硼酸缓冲液重悬AuNP‑SA偶联物；检测步骤：将上述反应液加入2微升AuNP‑SA偶联物，转移到划有跟Click Azide序列互补的核酸和跟Click CHCH序列互补的核酸分别作为检测线和质控线的试纸条上，加入40微升的上样缓冲液，进行检测，检测反应时间为30‑90min。