[发明专利]一种用于MMP2基因分型的ARMS-qPCR检测试剂盒及检测方法

摘要

本发明涉及分子生物学领域，具体涉及一种用于MMP2基因分型的ARMS-qPCR检测试剂盒，本发明还涉及一种基于本试剂盒的MMP2基因分型ARMS-qPCR检测方法。其中，本试剂盒包括qPCR反应体系，所述qPCR反应体系包括qPCR混合反应液、参照引物、ARMS引物和阳极对照样品；所述qPCR混合反应液包括PCR缓冲液、dNTP、MgCl₂、Tag酶、PCR下游引物和TaqMan探针；所述qPCR反应体系中，各组分的终浓度分别为：PCR缓冲液为1X；dNTP为0.1～1.5mM；MgCl₂为0.5～5mM；Tag酶为0.05～0.1U/μl；PCR下游引物为0.1～1μM；TaqMan探针为0.1～1μM；参照引物为0.5μM；ARMS引物为0.5μM；阳性对照样品为1～10ng/μl。与直接测序等基因分型的技术相比，本发明用于MMP2基因分型有特异性强、灵敏度高，操作简单快速、高通量、判读结果可靠，简便等优势。

主权项

一种用于MMP2基因分型的ARMS‑qPCR检测试剂盒，其特征在于：包括qPCR反应体系，所述qPCR反应体系包括qPCR混合反应液、参照引物、ARMS引物和阳极对照样品；所述qPCR混合反应液包括PCR缓冲液、dNTP、MgCl₂、Tag酶、PCR下游引物和TaqMan探针；所述qPCR反应体系中，各组分的终浓度分别为：PCR缓冲液为1X；dNTP为0.1～1.5mM；MgCl₂为0.5～5mM；Tag酶为0.05～0.1U/μl；PCR下游引物为0.1～1μM；TaqMan探针为0.1～1μM；参照引物为0.5μM；ARMS引物为0.5μM；阳性对照样品为1～10ng/μl。所述PCR下游引物的序列如MMP2‑R所示；所述TaqMan探针的序列如MMP2‑TaqMan所示；所述参照引物的序列如MMP2‑C所示，能够扩增所有不同MMP2基因型；所述ARMS引物为两种上游引物中的任意一种，分别对应MMP2CCrs1132896、TTrs1132896型基因型，这两种上游引物的序列如MMP2‑F1、MMP2‑F2所示；这两种ARMS引物分别在3’末端与不同的基因型碱基匹配，同时在其3’末端倒数第2、3位增加一个或者两个碱基错配，用于特异性扩增的MMP2rs1132896位基因型为CC/TT/TC；所述阳极对照样品分别为MMP2不同基因型碱基置换的质粒基因组DNA。