[发明专利]一种油田污水中硫酸盐还原菌的分离纯化方法

摘要

本发明公开了一种油田污水中硫酸盐还原菌的分离纯化方法，具体包括以下步骤：(1)SRB富集培养基的制备；(2)SRB分离培养基的制备；(3)SRB的富集培养；(4)SRB的分离培养；(5)SRB的纯化培养，本发明具有分离纯化的速度快，从SRB富集和分离培养基的制备到纯化培养物只需要3d～5d，分离纯化的成功率高，一次分离纯化既可得到纯化培养物，操作简单、对操作人员要求较低，针对性强，本方法只适合进行SRB菌种分离纯化，因此，可广泛地应用于油田污水中硫酸盐还原菌的分离纯化中。

主权项

一种油田污水中硫酸盐还原菌的分离纯化方法，其特征在于，该方法具体包括以下步骤：(1)SRB富集培养基的制备将富集培养基溶于蒸馏水中，厌氧分装到容积为7.8ml的厌氧瓶中，每瓶分装7ml，121℃高压蒸汽灭菌，其中，富集培养基配方为乳酸钠质量浓度0.4％～0.6％、硫酸亚铁铵质量浓度0.05％～0.2％、酵母浸粉质量浓度0.05％～0.1％、氯化钠质量浓度0.5％～2.0％、氯化镁质量浓度0.01％～0.03％；(2)SRB分离培养基的制备将分离培养基溶于蒸馏水中，加热至充分溶解，然后厌氧分装到容积为7.8ml的厌氧瓶中，每管7ml，121℃高压蒸汽灭菌，灭菌完后自然降温至50℃～55℃备用，其中，分离培养基配方为蛋白胨质量浓度0.8％～1.2％、肉浸粉质量浓度0.9％～1.1％、乳酸钠质量浓度0.4％～0.6％、硫酸亚铁铵质量浓度0.05％～0.2％、酵母浸粉质量浓度0.05％～0.1％、氯化钠质量浓度0.5％～2.0％、氯化镁质量浓度0.01％～0.03％、琼脂粉质量浓度0.8％～1.5％；(3)SRB的富集培养取油田污水0.2ml注入上述制备好的富集培养基中，恒温培养至培养液变黑为止，得到富集培养物；(4)SRB的分离培养取0.77ml上述富集培养物用制备好的富集培养基按照10倍系列稀释法稀释至10^‑4，将10^‑3和10^‑4梯度的稀释液用1ml无菌注射器取0.1ml，分别缓慢注入至上述50℃～55℃备用的分离培养基中，混合均匀，垂直静置放置0.5h～1h得到透明的半固体培养基，然后置于恒温培养箱中培养，培养至培养基中出现黑点为止，得到分离培养物；(5)SRB的纯化培养取1管上述富集培养基，用1ml无菌注射器抽取0.2ml富集培养基，接着用该注射器吸入分离培养物中轮廓清晰的黑点，然后注入该管富集培养基中，放置在恒温培养箱中培养，直到培养液变黑，得到纯化培养物。