[发明专利]一种胞苷高产微生物菌株的高通量筛选方法

摘要

本发明公开了一种胞苷高产微生物菌株的高通量筛选方法。它是将单菌落接种于装有液体种子培养基的深孔板I中，摇床震荡培养，然后将深孔板I孔中的种子液对应接种到装有发酵培养基的深孔板II中，摇床震荡培养后，将深孔板离心，取上清液测胞苷含量。在酶标板的微孔中加入发酵液上清、缓冲液和适量的胞苷脱氨酶，于30‑40℃温浴反应10‑40 min；反应结束后立即加入反应液A和反应液B，于30‑40℃温浴反应20‑50 min，然后采用酶标仪测定反应液的吸光度值，根据标准曲线和发酵液上清的稀释倍数计算胞苷产量。本发明实现了高通量培养、发酵液的高通量制备及胞苷的高通量测定的目标。

主权项

1.一种对胞苷生产菌发酵培养物中胞苷产量的检测方法，其特征在于按如下的步骤进行：(1)挑取胞苷生产菌的单菌落，接种于装有液体种子培养基的深孔板I中，盖上深孔板盖子，于30‑40℃、300‑800rpm摇床培养8‑14h；(2)将深孔板I孔中的种子液对应接种到装有发酵培养基的深孔板II中，30‑40℃、300‑800rpm摇床培养8‑48h；(3)将深孔板II放置于孔板离心机，5000‑10000×g离心5‑30min，以微量化梯度稀释法将发酵液上清稀释；(4)在酶标板的微孔中加入稀释的发酵液上清、缓冲液和适量的胞苷脱氨酶，以不加胞苷脱氨酶的实验为空白对照，于30‑40℃温浴反应10‑40min；(5)反应结束后立即加入反应液A和反应液B，且反应液A和B的加入顺序为反应液A在前，B在后，然后于30‑40℃温浴反应20‑50min；(6)步骤(5)反应结束后，采用酶标仪测定反应液的吸光度，根据发酵培养基中的胞苷标准曲线和发酵液上清的稀释倍数计算胞苷产量；其中，所述反应液A包含：氢氧化钠20‑30g/L、水杨酸45‑75g/L和亚硝基铁氰化钠1‑3g/L；反应液B包含：次氯酸钠40‑60ml/L，步骤(3)反应结束后产生的蓝色物质的检测波长为695‑700nm，或所述反应液A包含苯酚15‑30ml/L和亚硝基铁氰化钠0.8‑3g/L，反应液B为包含氢氧化钠10‑15g/L和次氯酸钠20‑40ml/L，步骤(3)反应结束后产生的蓝色物质的检测波长为625‑630nm。