[发明专利]一种弓形虫致密颗粒蛋白6抗体的制备方法在审
| 申请号： | 201410468090.7 | 申请日： | 2014-09-15 |
| 公开（公告）号： | CN104292329A | 公开（公告）日： | 2015-01-21 |
| 发明（设计）人： | 沈鹤霄;华权高 | 申请（专利权）人： | 沈鹤霄 |
| 主分类号： | C07K16/20 | 分类号： | C07K16/20;C07K16/06 |
| 代理公司： | 北京华沛德权律师事务所 11302 | 代理人： | 刘杰 |
| 地址： | 430206 湖北省武汉市东湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 一种弓形虫致密颗粒蛋白6抗体的制备方法，包括如下步骤：(1)选择目的片段作为表达重组蛋白的目的基因；(2)弓形虫致密颗粒蛋白6的合成；(3)弓形虫致密颗粒蛋白6的分离纯化；(4)制备兔抗弓形虫致密颗粒蛋白6多克隆抗体：用步骤(3)纯化后的重组弓形虫致密颗粒蛋白6作为抗原去免疫兔子，得到含抗重组弓形虫致密颗粒蛋白6抗体的抗血清；(5)对步骤(4)中得到的抗弓形虫致密颗粒蛋白6抗体的抗血清进行分离纯化，得到抗重组弓形虫致密颗粒蛋白6抗体干粉。该方法制备的抗体干粉可作为血清学检查的诊断原料，且本发明弓形虫致密颗粒蛋白6表达产量高。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 弓形虫 致密 颗粒 蛋白 抗体 制备 方法 | ||
【主权项】：
一种弓形虫致密颗粒蛋白6抗体的制备方法,其特征在于，包括如下步骤：(1)选择目的片段作为表达重组蛋白的目的基因：所选择的目的片段如序列表1所示；(2)弓形虫致密颗粒蛋白6的合成：将序列表中SEQ ID No.1所示的目的片段通过PCR扩增，所述扩增使用引物如下，上游引物：5'GACTAATTCGTTGGGTGGAGTCG 3'下游引物：5'GGCCTTTAGCGTTTCTGTGTTCGTTTG 3'扩增后插入质粒pET28a中，形成pET28a‑GRA6质粒载体并转化大肠埃希菌BL21(DE3)，在加入相应抗体的平板上筛选含有重组质粒的单菌落，提取重组质粒验证，在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达目的蛋白；(3)弓形虫致密颗粒蛋白6的分离纯化：采用Ni柱纯化，包括蛋白提取和蛋白纯化；(4)制备兔抗弓形虫致密颗粒蛋白6多克隆抗体：用步骤(3)纯化后的重组弓形虫致密颗粒蛋白6作为抗原去免疫兔子，得到含抗重组弓形虫致密颗粒蛋白6抗体的抗血清；(5)对步骤(4)中得到的抗弓形虫致密颗粒蛋白6抗体的抗血清进行分离纯化，得到抗重组弓形虫致密颗粒蛋白6抗体干粉。
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