[发明专利]一种检测融合基因AML1-ETO mRNA表达的试剂盒及其检测方法

摘要

本发明提出了一种检测融合基因AML1-ETO mRNA表达的试剂盒，采用TaqMan荧光探针技术，选取融合基因AML1-ETO及内参基因ABL为靶区域，分别设计特异性引物及荧光探针，其中荧光探针5’端标记荧光发射基团FAM，3’端标记非荧光淬灭基团BHQ1，利用荧光PCR检测仪可在FAM通道检测荧光信号，由于内参基因ABL在细胞中的表达相对恒定，在本试剂盒中可作为内参对起始细胞量进行校正，用于整个核酸提取和反应体系的质量控制。本发明还提出了上述检测融合基因AML1-ETO mRNA表达的试剂盒的检测方法。本发明具有很高的灵敏度和特异性，有利于诊断、评价患者疗效、预后及对微小残留病变复发的监测。

主权项

一种检测融合基因AML1‑ETO mRNA表达的试剂盒，其特征在于包括：(a)RNA提取试剂、AML1‑ETO反应液、ABL反应液、一步法PCR酶系、AML1‑ETO阳性定量参考品1‑5、ABL阳性定量参考品1‑4和DEPC水；(b)分隔并集中包装上述试剂的试剂管的包装盒；所述的RNA提取试剂包括5×的红细胞裂解液、RNA提取液‑Trizol试剂、氯仿、异丙醇和DEPC乙醇；所述的AML1‑ETO反应液包括正向引物、反向引物、AML1‑ETO的寡核苷酸探针、PCR反应缓冲液，其中AML1‑ETO反应液中正向和反向引物分别是：5’‑GGATGGGCCCCGAGAAC‑3’(SEQ ID NO:1)；5’‑GTCAGCCTAGATTGCGTCTTCA‑3’(SEQ ID NO:2)；AML1‑ETO的寡核苷酸探针是：5’‑X‑TCGAAATCGTACTGAGAAGCACTCCA‑Y‑3’(SEQ ID NO:3)，其中X表示的是荧光报告基团，Y表示的是荧光淬灭基团；所述的ABL反应液包括正向引物、反向引物、ABL的寡核苷酸探针、PCR反应缓冲液，其中ABL反应液中正向和反向引物分别是：5’‑GACGTCTGGGCATTTGGAGTA‑3’(SEQ ID NO:4)5’‑TCATACACCTGGGACAGGTCAA‑3’(SEQ ID NO:5)ABL的寡核苷酸探针是:5’‑X‑ATGGCATGTCCCCTTACCCGGGA‑Y‑3’(SEQ ID NO:6)，其中X表示的是荧光报告基团，Y表示的是荧光淬灭基团；所述的AML1‑ETO阳性定量参考品1‑5为均含有浓度为1×103拷贝/5μL～1×107拷贝/5μL的AML1‑ETO目的片段的重组质粒；所述的ABL阳性定量参考品1‑4为均含有浓度为1×103拷贝/5μL～1×106拷贝/5μL的ABL目的片段的重组质粒。