[发明专利]一种干酪乳杆菌鼠李糖亚种的亚硝酸盐还原酶的制备方法在审
| 申请号： | 201410437877.7 | 申请日： | 2014-08-29 |
| 公开（公告）号： | CN104212775A | 公开（公告）日： | 2014-12-17 |
| 发明（设计）人： | 刘冬梅;陈浩;周劲松;张馨月 | 申请（专利权）人： | 华南理工大学 |
| 主分类号： | C12N9/06 | 分类号： | C12N9/06;C12R1/245 |
| 代理公司： | 广州市华学知识产权代理有限公司 44245 | 代理人： | 宫爱鹏 |
| 地址： | 511458 广东省广州市*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种干酪乳杆菌鼠李糖亚种的亚硝酸盐还原酶的制备方法，首先将干酪乳杆菌鼠李糖亚种(Lactobacillus casei subsp rhamnosus)6013进行含亚硝酸盐还原酶的诱导培养，破壁时加入酶保护剂提取亚硝酸盐还原酶粗酶，再进行真空冷冻干燥后，依次经阴离子交换层析和/或葡聚糖凝胶层析，最后制得纯亚硝酸盐还原酶，从干酪乳杆菌鼠李糖亚种中提取的NiR的活力高，NiR降解亚硝酸盐的条件简单；本发明所公开的条件可使NiR的酶活损失少，得到的NiR纯度高，NiR可以解决蔬菜发酵、肉制品和养殖水体等3个领域中含亚硝酸盐的问题。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 干酪 杆菌 鼠李糖亚种 亚硝酸盐 还原酶 制备 方法 | ||
【主权项】：
一种干酪乳杆菌鼠李糖亚种的亚硝酸盐还原酶的制备方法，其特征在于，包括如下步骤和工艺条件：(1)将干酪乳杆菌鼠李糖亚种(Lactobacillus casei subsp.rhamnosus)6013的冻干粉置于MRS培养基中，于30℃～40℃静止培养18h～36h后，制成种子液；(2)以1％～10％的体积百分比，将上述种子液接种至诱导培养基A中，于30℃～40℃静止诱导培养18h～24h，得诱导工作发酵剂；所述诱导培养基A配方为：含诱导剂NaNO25μg/mL～20μg/mL的MRS培养基；(3)以5％～15％的体积百分比，将诱导工作发酵剂接种至诱导培养基B中，于30℃～40℃静止诱导培养24h～36h，得含亚硝酸盐还原酶的培养液；所述诱导培养基B配方为：含诱导剂NaNO210μg/mL～50μg/mL的MRS培养基；(4)将含亚硝酸盐还原酶的培养液进行离心，用生理盐水清洗后离心，得含亚硝酸盐还原酶的菌体；(5)加入提酶缓冲液，使含亚硝酸盐还原酶的菌体浓度为150mg/mL～400mg/mL，加入溶菌酶，混匀后破壁1h～5h，破壁溶液经离心后的上清液为亚硝酸盐还原酶粗酶液。
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