[发明专利]一种生物合成(R)-3-羟基戊二酸单酯的新方法

摘要

本发明涉及(R)-3-羟基戊二酸单酯的生物合成新方法。更具体的，本发明提供了一种利用卤醇脱卤酶与腈水解酶或双酶共表达重组菌催化(S)-4-氯-3-羟基丁酸酯一锅法制备(R)-3-羟基戊二酸单酯的方法，所述的(R)-3-羟基戊二酸单酯是氟伐他汀、瑞舒伐他汀及匹伐他汀等他汀类药物的关键中间体。本方法具有反应条件温和、无污染和工艺路线简单等显著特点。

主权项

一种生物合成(R)‑3‑羟基戊二酸单酯的新方法，其特征在于利用卤醇脱卤酶和腈水解  酶或它们共表达重组菌催化(S)‑4‑氯‑3‑羟基丁酸单酯一锅法制备(R)‑3‑羟基戊二酸单酯，包括如下步骤：a）卤醇脱卤酶重组菌、腈水解酶重组菌及双酶共表达重组菌的构建；b）将卤醇脱卤酶重组菌、腈水解酶重组菌或双酶共表达重组菌分别在发酵培养基中扩增培养，并进行诱导产生目的蛋白后，离心收集菌体；c）将收集的卤醇脱卤酶与腈水解酶或双酶共表达重组菌悬浮在缓冲液中，加入一定量的(S)‑4‑氯‑3‑羟基丁酸单酯，并添加适量的氰化钠或氰化钾，在适当条件下反应一定时间，底物经过中间产物(R)‑4‑氰基‑3‑羟基丁酸单酯，最终转化为(R)‑3‑羟基戊二酸单酯； d）反应中止后从反应体系中收集上层清液，先用过氧化氢处理，再用盐酸酸化，并用乙酸乙酯萃取多次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，旋蒸回收溶剂得到目标产物。