[发明专利]表达和纯化RANK胞外区域蛋白的方法

摘要

本发明提供了一种表达和纯化RANK胞外区域蛋白的方法。该方法包括(1)构建具有编码RANK胞外区域的cDNA的载体，将该载体转化到原核细胞中，从而得到以包涵体形式表达的重组RANK；(2)对该包涵体进行超声处理，然后重新溶解在6M的盐酸胍中，得到解离状态的重组RANK；(3)重新折叠重组RANK；(4)将上清液利用琼脂75柱进行分离；(5)通过SDS‑PAGE收集并分析正确折叠的RANK。本发明提供的方法尤其适用于鼠RANK胞外区域蛋白的表达与纯化。

主权项

一种表达和纯化RANK胞外区域蛋白的方法，包括：(1)构建具有编码RANK胞外区域的cDNA的载体，将所述载体转化到原核细胞中，从而得到以包涵体形式表达的重组RANK；所述RANK的胞外区域是指鼠RANK单体N‑末端从26位氨基酸至210位氨基酸的区域；所述鼠RANK单体的氨基酸序列为：MAPRARRRRQLPAPLLALCVLLVPLQVTLQVTPPCTQERHYEHLGRCCSRCEPGKYLSSKCTPTSDSVCLPCGPDEYLDTWNEEDKCLLHKVCDAGKALVAVDPGNHTAPRRCACTAGYHWNSDCECCRRNTECAPGFGAQHPLQLNKDTVCTPCLLGFFSDVFSSTDKCKPWTNCTLLGKLEAHQGTTESDVVCSSSMTLRRPPKEAQAYLPSLIVLLLFISVVVVAAIIFGVYYRKGGKALTANLWNWVNDACSSLSGNKESSGDRCAGSHSATSSQQEVCEGILLMTREEKMVPEDGAGVCGPVCAAGGPWAEVRDSRTFTLVSEVETQGDLSRKIPTEDEYTDRPSQPSTGSLLLIQQGSKSIPPFQEPLEVGENDSLSQCFTGTESTVDSEGCDFTEPPSRTDSMPVSPEKHLTKEIEGDSCLPWVVSSNSTDGYTGSGNTPGEDHEPFPGSLKCGPLPQCAYSMGFPSEAAASMAEAGVRPQDRADERGASGSGSSPSDQPPASGNVTGNSNSTFISSGQVMNFKGDIIVVYVSQTSQEGPGSAEPESEPVGRPVQEETLAHRDSFAGTAPRFPDVCATGAGLQEQGAPRQKDGTSRPVQEQGGAQTSLHTQGSGQCAE；(2)对所述包涵体进行超声处理，然后重新溶解在6M的盐酸胍中，得到解离状态的所述重组RANK；(3)重新折叠所述重组RANK，所述重新折叠的过程包括：将所述包涵体稀释在包含20mM、pH值为7.3的Na2HPO4、1M L‑精氨酸、20％甘油、10mM还原型谷胱苷肽以及1mM氧化型谷胱苷肽的复性(IB)溶液中，得到第一复性液；将所述第一复性液稀释在含有20mM、pH值为7.3的Na2HPO4、0.5M L‑精氨酸、10％甘油的重新折叠缓冲液1中4℃下透析12小时，得到第二复性液；将所述第二复性液稀释在含有20mM、pH值为7.3的Na2HPO4、0.2M L‑精氨酸、5％甘油的重新折叠缓冲液2中4℃下透析12小时，得到第三复性液；将所述第三复性液稀释在20mM、pH值为7.3的Na2HPO4、0.2M L‑精氨酸中4℃下透析12小时，得到第四复性液；将所述第四复性液离心，得上清液；(4)将所述上清液利用琼脂75柱进行分离；(5)通过SDS‑PAGE收集并分析正确折叠的RANK。