[发明专利]一种提高胭脂萝卜胚胎发生率的方法

摘要

本发明公开了一种提高胭脂萝卜胚胎发生率的方法，包括取胭脂萝卜花蕾，灭菌后加入B5洗涤培养基，制成悬浮液，过滤所得滤液经离心得到沉淀；依次加入NLN‐13诱导培养基和活性炭混合液，得到小孢子悬浮液；分装到无菌培养皿中后加入无菌青花菜花药，Parafilm封口后热击处理；经常规培养后，得到子叶型胚状体；接种至胚状体分化培养基中直至分化，再生成芽；切取再生芽接种至生根培养基上生根培养，经炼苗和移栽，得到再生植株。该方法将易出胚的青花菜花药与难出胚的胭脂萝卜游离小孢子按一定比例混合培养，从而促进难出胚的胭脂萝卜胚胎发育，获得大量再生植株，提高培养效率。

主权项

一种提高胭脂萝卜胚胎发生率的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)取胭脂萝卜和青花菜的花蕾，灭菌；所述胭脂萝卜和青花菜的花蕾均处于单核晚期至双核早期；2)将混合花蕾灭菌后的胭脂萝卜游离小孢子与青花菜花药置于培养液中，小孢子悬浮液与花药混合后采用32～33℃热击处理1～3天，先在25℃、黑暗条件下恒温培养10～15天至肉眼可见细胞团出现后，移到25℃、黑暗条件下50～60rpm振荡培养10～15天，得到子叶型胚状体，胭脂萝卜花蕾与青花菜花药的数量比为1：5～8；所述培养液为NLN‑13液体培养基和无菌活性炭混合液的混合物，其中活性炭混合液的组成为：1L NLN液体培养基、2～5g琼脂糖和1g活性炭；3)将子叶型胚状体接种至固体分化培养基中，培养得到再生植株；所述固体分化培养基为B5培养基+蔗糖30g/L，琼脂10～12g/L，pH 5.9～6.1；所述B5培养基以1L计，组成为：NaH2PO4·2H2O 169.5mg,KNO3 2500mg，(NH4)2SO4 134mg，MgSO4·7H2O 500mg，MnSO4·4H2O 10mg,H3BO3 3mg,ZnSO4·7H2O 2mg,KI 0.75mg,Na2MoO4·2H2O 0.25mg,CuSO4·5H2O 0.025mg,CoCl2·6H2O 0.025mg,Na2‑EDTA 37.3mg,FeSO4·7H2O 27.8mg,CaCl2·2H2O 150mg,VB1 10mg,VB6 1mg,VPP 1mg,肌醇100mg和余量的蒸馏水；4)从再生植株切取再生芽，接入生根培养基，获得完整植株；所述生根培养基由1/2MS培养基1L+0.1～0.2mg/L NAA+0.1～0.2mg/L IBA、蔗糖或白砂糖20～30g/L和琼脂7～8g/L组成，pH 5.8～6.0。