[发明专利]猪带绦虫重组双歧杆菌疫苗稳定性的研究方法在审
| 申请号： | 201410334944.2 | 申请日： | 2014-07-15 |
| 公开（公告）号： | CN104099364A | 公开（公告）日： | 2014-10-15 |
| 发明（设计）人： | 周必英 | 申请（专利权）人： | 遵义医学院 |
| 主分类号： | C12N15/74 | 分类号： | C12N15/74;C12Q1/68;C12Q1/04;C12R1/01 |
| 代理公司： | 贵阳中新专利商标事务所 52100 | 代理人： | 吴无惧 |
| 地址： | 563003 *** | 国省代码： | 贵州;52 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种猪带绦虫重组双歧杆菌疫苗稳定性的研究方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）分别将猪带绦虫重组质粒pGEX-TSO45W-4B、pGEX-TSOL18和pGEX-TSO45W-4B-TSOL18与B.longum感受态细菌混匀，冰浴后转移至电击杯中，电击完毕后立即将混合液转入到MRS液体培养基的EP管中厌氧培养；将菌液涂布于含氨苄青霉素的MRS琼脂平板上，厌氧培养；（2）挑取上述平板中单个菌落至含氨苄青霉素的MRS液体培养基的EP管中，厌氧培养；将菌液离心，弃上清，沉淀中加入蔗糖溶液重溶菌体沉淀，温浴；抽提质粒为模板，进行PCR鉴定；（3）阳性菌株传代培养的稳定性或阳性菌株不同保存条件的稳定性：取上述鉴定的阳性菌株在MRS培养基中传代，每次传代抽提质粒为模板，进行PCR鉴定；或将上述鉴定的阳性菌株分别放置不同温度不同时间后，取出保存的菌液，抽提质粒，进行电泳鉴定。 | ||
| 搜索关键词： | 绦虫 重组 杆菌 疫苗 稳定性 研究 方法 | ||
【主权项】：
猪带绦虫重组双歧杆菌疫苗稳定性的研究方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）重组质粒电转化长双歧杆菌：分别将猪带绦虫重组质粒pGEX‑TSO45W‑4B、pGEX‑TSOL18和pGEX‑TSO45W‑4B‑TSOL18与B.longum感受态细菌混匀，冰浴后转移至电击杯中，电击完毕后立即将混合液转入到MRS液体培养基的EP管中厌氧培养；将菌液涂布于含氨苄青霉素的MRS琼脂平板上，厌氧培养； （2）阳性菌株的PCR鉴定：挑取上述平板中单个菌落至含氨苄青霉素的MRS液体培养基的EP管中，厌氧培养；将菌液离心，弃上清，沉淀中加入蔗糖溶液重溶菌体沉淀，温浴；抽提质粒为模板，进行PCR鉴定；（3）阳性菌株传代培养的稳定性或阳性菌株不同保存条件的稳定性：取上述鉴定的阳性菌株在MRS培养基中传代，每次传代抽提质粒为模板，进行PCR鉴定；或将上述鉴定的阳性菌株分别放置不同温度不同时间后，取出保存的菌液，抽提质粒，进行电泳鉴定。
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