[发明专利]同步检测苹果属上三种检疫性疫霉的四重PCR引物及其扩增方法

摘要

本发明公开了一种同步检测苹果属植物上三种检疫性疫霉的四重PCR引物及其扩增方法与用途，涉及4套引物，即疫霉属通用引物、冬生疫霉特异引物、丁香疫霉特异引物和栗黑水疫霉特异引物，其中通用引物用于菌丝基因组DNA的质量控制，建立的四重PCR分子检测，经琼脂糖凝胶电泳观察，疫霉属菌株均应出现884bp的扩增片段，冬生疫霉还应出现232bp特异片段，丁香疫霉还应出现683bp特异片段，栗黑水疫霉还应出现314bp特异片段，四套引物可有效用于三种疫霉的菌丝基因组DNA四重PCR特异扩增。

主权项

一种同步检测检疫性真菌病害冬生疫霉P.hibernalis、丁香疫霉P.syringae和栗黑水疫霉P.cambivora的四重PCR引物，引物序列如下：三种疫霉的通用引物：18SUF：CGC GGT AAT TCC AGC TCC AAT A18SUR：AGA ACA TCT AAG GGC ATC ACA GAC C冬生疫霉的特异引物：PHSF：CTT TGC TCG AAA AGC ATA ATG GAAPHSR：CCA CTC TAC TTC ACA CAA CAT CCT丁香疫霉的特异引物：PSSF：AGG AGG AAG GCG AGA AGG CCPSSR：GTA GTA GAT GCC GGG CTG CG栗黑水疫霉的特异引物：PCSF：CAA GCT CCA GAT TGT GCG TGPCSR：CGA ATC AAA GCG GTC CAA CC所述引物18SUF/18SUR用于冬生疫霉、丁香疫霉和栗黑水疫霉菌丝基因组DNA扩增，扩增片段为884bp，作为提取和扩增过程的质量控制，PHSF/PHSR扩增片段为232bp，PSSF/PSSR扩增片段为683bp，PCSF/PCSR扩增片段为314bp，这四套特异引物用于冬生疫霉、丁香疫霉和栗黑水疫霉的菌丝基因组DNA特异四重PCR扩增。