[发明专利]对柑桔大实蝇进行亲缘关系和聚类分析的分子标记方法

摘要

本发明一种对柑桔大实蝇进行亲缘关系和聚类分析的分子标记方法，属于分子标记技术领域。本发明利用7条RAPD引物和10对SRAP引物组合对柑桔大实蝇DNA进行PCR扩增，扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳并拍照记录结果，统计被检测材料的扩增带；用遗传分析软件进行分析，获得个体之间的遗传距离，根据个体间的遗传距离聚类结果，绘制不同地理种群柑桔大实蝇的聚类图，区分不同的类群。本发明反应稳定、扩增片段清楚、多态性高，构建了柑桔大实蝇种群遗传多样性的分子反应体系，能揭示其种群间的遗传多样性，能快速、准确地对柑桔大实蝇进行聚类分析，区分不同的种群，对于监测及防治柑桔大实蝇有重要意义。

主权项

一种对柑桔大实蝇进行亲缘关系和聚类分析的分子标记方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)提取待测柑桔大实蝇样品的DNA，保存备用；(2)用7条RAPD引物对步骤1得到的DNA分别进行PCR扩增，所述的7条RAPD引物名称和序列如下：1：ACGCCAGAGG，2：GAGCGAGGCT，3：CAGGGGTGGA，4：GGTCTGGTTG，S75：GACGGATCAG，Y06：AAGGCTCACC，Y18：GCTGAGTCAG；(3)用10对SRAP引物组合对步骤1得到的DNA分别进行PCR扩增，所述的10对SRAP引物组合名称为：3F‑1R，3F‑2R，9F‑1R，9F‑3R，9F‑2R，9F‑11R，4F‑10R，12F‑11R，10F‑3R，10F‑10R；其中，所述各引物序列如下：(4)将步骤2、3得到的扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳并拍照记录结果，统计被检测材料的扩增带，有带计为“1”，无带计为“0”，强带和弱带均计为“1”，组成“0‑1”数据矩阵；用遗传分析软件进行分析，获得个体之间的遗传距离，根据个体间的遗传距离聚类结果，绘制不同地理种群柑桔大实蝇的聚类图，区分不同的类群。