[发明专利]一种人胞质凝溶胶蛋白的表达纯化方法

摘要

本发明涉及一种人胞质凝溶胶蛋白的表达纯化方法，通过设计引物，构建重组表达载体pET-15b-hcGSN，利用IPTG诱导表达得到N端带有His标签的重组目的蛋白hcGSN，并经过镍离子亲和层析一步纯化可以得到纯度较高的重组蛋白hcGSN。本发明还在His标签与hcGSN的氨基酸序列之间设计有凝血酶的切割位点，需要时可以使用凝血酶去除His标签。本发明提供了一种生产重组人胞质凝溶胶蛋白的方法，实现了人胞质凝溶胶蛋白在大肠杆菌中的大量可溶性表达，经镍离子亲和层析纯化能够高效、简便、稳定地获得高纯度的重组人胞质凝溶胶蛋白hcGSN。该重组蛋白为相关科学研究提供物质基础，未来可能被应用于预防和治疗肿瘤与阿尔茨海默症等疾病。

主权项

一种人胞质凝溶胶蛋白的表达纯化方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：（1）构建含有人胞质凝溶胶蛋白基因（hcGSN）的重组表达载体pET‑15b‑hcGSN；（2）将重组表达载体pET‑15b‑hcGSN转化于大肠杆菌BL21(DE3)，得到含有重组质粒的工程菌株；（3）将工程菌接种于LB液体培养基中培养，加入终浓度为0.4mM的IPTG，于37℃诱导表达4小时；（4）5000rpm离心收集菌体并于冰浴中超声波裂解，然后15000rpm离心获取上清；（5）将上清上样于镍离子亲和层析柱Ni Sepharose 6 Fast Flow，纯化得到N端带有His标签的重组蛋白hcGSN。