[发明专利]一种克氏原鳌虾非特异性免疫增强剂的制备方法和应用

摘要

本发明涉及一种克氏原鳌虾非特异性免疫增强剂的制备方法和应用，取带鱼加工副产物，加入磷酸缓冲液和复合水解酶，控制反应条件制得鱼加工副产物蛋白肽水解液，加入金属元素和少量的V_C保护，形成螯合反应体系，螯合反应结束后，将离心获得的上清液采用超/纳滤截留获得分子量<1500Da水解肽-金属元素配合物，经真空浓缩、真空冷冻干燥后，得非特异性免疫增强剂。使用时将该非特异性免疫增强剂以800～1500mg/kg的比例加入克氏原鳌虾常规基础营养饲料。该发明利用带鱼加工副产物作为原料，不仅降低了成本，提高了经济效益，且该制备方法操作简单、易控；该免疫增强剂的应用不仅操作简单，且可使虾体更好地摄入和吸收，从而有效增强虾体的免疫机能，更好地抵御各种鳌虾常见病的侵害。

主权项

一种克氏原鳌虾非特异性免疫增强剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤：（1）取带鱼加工副产物，加入磷酸缓冲液，40～50℃保温10～15min，接着经组织打碎、超声处理后，加入2～8g/L复合水解酶，控制温度为水浴恒温37～60℃，水解度为20～30%，前述磷酸缓冲液的浓度为0.05～0.20mol/L，pH值为6.8～7.6，磷酸缓冲液与带鱼加工副产物的体积比为4～6:1，前述复合水解酶为质量比为1～3:1:1的风味蛋白酶、木瓜蛋白酶以及碱性蛋白酶的混合物，前述超声波处理条件为25～40KHZ，时间为1.0～4.0min；（2）继续升温至85～95℃，保持2.0～3.0min后，冰浴快速冷却至0～4℃，3000～4500r/min离心分离10～20min获得上清液，即为带鱼加工副产物蛋白肽水解液；（3）调节上述获得的带鱼加工副产物蛋白肽水解液pH值至6.9～7.1，加入终浓度为1.0～3.0g/L的金属元素，同时加入少量的V_C保护，形成螯合反应体系，调节螯合反应体系pH为4.0～7.0，在20～35℃恒温条件下进行水浴振荡，螯合反应20～40min，前述金属元素为Fe²⁺、Ca²⁺、Zn²⁺中的一种或几种混合物；（4）螯合反应结束后，8000～10000r/min离心分离15～25min，将获得的上清液采用超/纳滤截留获得分子量<1500Da水解肽‑金属元素配合物，经真空浓缩、真空冷冻干燥后，得带鱼加工副产物蛋白水解肽‑金属元素配合物，即非特异性免疫增强剂。