[发明专利]水蛭纤溶蛋白及其制备方法与应用

摘要

本发明公开了一种水蛭纤溶蛋白，是通过以下方法制备得到的：(1)水蛭纤溶蛋白粗品的提取；(2)上述水蛭纤溶蛋白粗品提取液进行QSephroseFastFlow离子交换柱层析，用NaCl溶液线性洗脱，收集第五个洗脱峰所对应的洗脱液，浓缩并干燥，得水蛭纤溶粗蛋白；(3)将上述得到的水蛭纤溶粗蛋白用蒸馏水溶解，SephacrylS-200凝胶过滤层析，蒸馏水洗脱，取第一个洗脱峰所对应的洗脱液，浓缩并干燥，即得水蛭纤溶蛋白。本发明进行了水蛭纤溶蛋白的体外纤溶试验以及动物体内溶栓试验，结果表明：本发明的水蛭纤溶蛋白对凝血过程中形成的纤维蛋白有明显的溶解作用；对模型小鼠体内的血栓有溶解作用。预示水蛭纤溶蛋白在制备溶栓药物中有很大的开发应用前景。

主权项

一种水蛭纤溶蛋白，其特征在于：是通过以下方法制备得到的：(1)水蛭纤溶蛋白粗品的提取：取宽体金线蛭干品，粉碎得水蛭干品粉末，加入15～25重量倍的水浸泡40～60小时后匀浆，得匀浆液；匀浆液用胰蛋白酶和粗酶酶解；酶解完毕后，向酶解液中加无水乙醇或体积百分数≥90的乙醇溶液，至乙醇的体积百分数达60％～80％，静置10～15小时，抽滤得上清液，上清液减压浓缩，得水蛭纤溶蛋白粗品提取液；(2)上述水蛭纤溶蛋白粗品提取液进行QSephroseFastFlow离子交换柱层析，用0.14mol/L～2mol/L的NaCl溶液线性洗脱，得到七个洗脱峰，收集第五个洗脱峰所对应的洗脱液，浓缩并干燥，得水蛭纤溶粗蛋白；(3)将上述得到的水蛭纤溶粗蛋白用蒸馏水溶解，SephacrylS‑200凝胶过滤层析，蒸馏水洗脱，得到四个洗脱峰，取第一个洗脱峰所对应的洗脱液，浓缩并干燥，即得水蛭纤溶蛋白。